牛奶中黃曲霉毒素M1降解菌株的篩選及鑒定.pdf

1、黃曲霉毒素(Aflaloxin， AFT)是由 Aspergilfusft avar.Aspergillumsnomw.Aspergiiluspa rariticus等多種真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有很強(qiáng)的毒性、致癌性、致突變性和致畸性，對(duì)人類和家畜的健康危害很大。采用微生物或其產(chǎn)生的酶來(lái)對(duì)其進(jìn)行脫毒處理?xiàng)l件相對(duì)溫和，不會(huì)破壞產(chǎn)品的品質(zhì)，而且有些還能增加產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
　　本研究旨在篩選并鑒定出能夠降解黃曲霉毒素M1(AFM1)

2、的菌株，從而能夠在AFM1的生物降解中得到應(yīng)用。本研究首次分離并鑒定了能夠顯著降解AFM1的菌株—纖維纖維微菌(Cellulosimicrobium cellulans)，并通過(guò)對(duì)其發(fā)酵條件的優(yōu)化，將其對(duì)AFM1的降解率提高到78.9％。
　　本研究主要包括以下內(nèi)容:
　　第一部分:能夠降解AFM1的細(xì)菌的篩選。本研究從動(dòng)物腸道、奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)土壤環(huán)境中分離出能夠以香豆素為唯一碳源和能源的細(xì)菌，共計(jì)13株。將AFM1以0.1μg

3、/kg的濃度添加到牛奶中，人工制備AFM1污染樣品。將篩選到菌株的發(fā)酵液50μL添加到50mL人工制備的樣品中，37℃處理72h，采用高效液相色譜法測(cè)定樣品中AFM1濃度，計(jì)算降解率。結(jié)果表明，13株細(xì)菌對(duì)AFM1降解率的差異明顯，其中編號(hào)為N4-5-2的菌株對(duì)AFM1降解率最高，為61.11％。
　　第二部分:對(duì)AFM1降解率最高的N4-5-2菌株的鑒定。本研究從形態(tài)學(xué)、生化反應(yīng)以及16S rDNA序列比對(duì)等方面，對(duì)N4-5-2

4、進(jìn)行鑒定，結(jié)果為纖維纖維微菌(Cellulosimicrobium cellulans)，屬放線菌門(Actinobacteria class)，放線菌目(Actinomycetales order)，微球菌亞目(Micrococcineae suborder)，纖維微菌屬（Cellulosimicrobium sp.）。該菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上菌落為淺黃色，表面光滑，略突起，半透明，邊緣整齊的圓形菌落，用接種針挑起時(shí)有膠狀粘連，為革蘭氏

5、陽(yáng)性球形菌體，直徑0.5μm，單個(gè)、成對(duì)或成堆排列。使用16S rDNA通用引物進(jìn)行擴(kuò)增，并將擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序，在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)后，使用MEG4.1對(duì)序列相似度進(jìn)行計(jì)算，并做系統(tǒng)發(fā)育分析，確認(rèn)為纖維纖維微菌。
　　第三部分:N4-5-2發(fā)酵條件對(duì)AFM1降解率的影響。本部分研究了發(fā)酵溫度、起始pH值和轉(zhuǎn)速等三個(gè)因素對(duì)AFM1降解率的影響。結(jié)果表明影響因素顯著性依次是:起始pH值＞溫度＞轉(zhuǎn)速。其中溫度和起始pH值為顯著因素，轉(zhuǎn)速為