兔髓核細(xì)胞凋亡與BNIP3表達(dá)及意義.pdf

1、目的：
　　 探討髓核細(xì)胞凋亡程度與BNIP3表達(dá)的關(guān)系。為深入了解髓核細(xì)胞凋亡的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 兔退變椎間盤髓核組織BNIP3表達(dá)檢測：健康3月齡雄性新西蘭大白兔40只，體重（2.3±0.2）kg，隨機(jī)分為對照組（n=10）及實(shí)驗(yàn)組（n=20）。實(shí)驗(yàn)組大白兔采用針刺L3、4、L4、5及L5、6 椎間盤制備椎間盤退變模型。于術(shù)后4、8周實(shí)驗(yàn)組各取10只大白兔、對照組各取5只大白兔，通過MR

2、I 檢查評價(jià)手術(shù)椎間盤退變情況，采用組織學(xué)觀察和TUNEL 法檢查兔椎間盤髓核組織中凋亡細(xì)胞，用免疫組織化學(xué)染色法檢測兔椎間盤髓核細(xì)胞BNIP3的表達(dá)。
　　 體外缺氧條件下髓核細(xì)胞凋亡與BNIP3表達(dá)檢測：采用組織塊法原代培養(yǎng)兔NPCs，取一代細(xì)胞分別在正常氧和1％氧濃度下培養(yǎng)24、48、72小時(shí)，應(yīng)用臺盼藍(lán)染色、流式細(xì)胞術(shù)及TUNEL 染色觀察缺氧對細(xì)胞凋亡的影響；采用免疫組化及RT-PCR觀察BNIP3在缺氧條件下培養(yǎng)的N

3、PCs中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 兔退變椎間盤髓核組織BNIP3表達(dá)檢測：
　　 （1）MRI 檢查示實(shí)驗(yàn)組未手術(shù)對照節(jié)段(L1、2、L2、3及L6、7)椎間盤均正常，術(shù)后4、8周手術(shù)節(jié)段椎間盤髓核信號強(qiáng)度呈逐漸降低趨勢。
　　 （2）組織學(xué)觀察及TUNEL 檢查示對照組椎間盤組織中髓核細(xì)胞密度高，偶見極少量散在的凋亡細(xì)胞存在。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后4周、8周時(shí)椎間盤組織內(nèi)髓核細(xì)胞密度逐漸降低，存在較多的凋亡

4、細(xì)胞。
　　 （3）對照組椎間盤組織髓核細(xì)胞中無BNIP3蛋白表達(dá)；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后4周、8周椎間盤組織髓核細(xì)胞中BNIP3蛋白表達(dá)逐漸上調(diào)。體外缺氧條件下髓核細(xì)胞凋亡與BNIP3表達(dá)檢測：正常氧條件下BNIP3 沒有表達(dá)，缺氧條件下隨著培養(yǎng)時(shí)間的延續(xù)，NPCs 凋亡率不斷增加 BNIP3表達(dá)不斷增強(qiáng)。
　　 結(jié)論：
　　 （1）椎間盤的退變與髓核組織中細(xì)胞密度下降有關(guān)；（2）細(xì)胞凋亡是椎間盤髓核細(xì)胞減少的原因之一；（