金磁復(fù)合微粒的制備及在氯霉素檢測(cè)中的應(yīng)用探討.pdf

1、金磁復(fù)合微粒Fe3O4/Au具備良好的磁學(xué)性能和生物相容性，在生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)和食品安全檢測(cè)領(lǐng)域得到了廣泛的關(guān)注。本文研究了Fe3O4-PEI復(fù)合微粒和兩種Fe3O4/Au復(fù)合微粒的制備，并對(duì)三者的形貌、晶體結(jié)構(gòu)、光學(xué)性能、磁學(xué)性能等方面進(jìn)行了表征;以多層復(fù)合型Fe3O4/Au微粒為載體，構(gòu)建磁分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)體系，探討其在氯霉素檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。本文的具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　 1、氨基化磁性復(fù)合微粒Fe3O4-PEI的制備<

2、br>　　 采用溶劑熱法制備氨基化的磁性復(fù)合微粒Fe3O4-PEI，此復(fù)合微粒為球形，具有良好的分散性和晶體結(jié)構(gòu)，并且粒徑隨反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增大，隨乙酸鈉用量的增加而減小。通過控制這兩方面實(shí)驗(yàn)因素得到100 nm-400 nm范圍內(nèi)的Fe3O4-PEI復(fù)合微粒。其中，粒徑在100nm-200nm范圍內(nèi)的磁性微粒生物毒性較低，磁學(xué)性能不受微粒團(tuán)聚的影響。因此選擇粒徑約為150nm的樣品用于金磁復(fù)合微粒的制備。
　　 2、金磁復(fù)合

3、微粒的制備
　　 以粒徑約為150 nm的Fe3O4-PEI復(fù)合微粒為核心，表面包被膠體金制備兩種金磁復(fù)合微粒。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，多層復(fù)合型比組裝型具有更高的膠體金包被率。多層復(fù)合型金磁微粒的粒徑約為180nm;光學(xué)性能良好，在560nm附近有明顯的特征吸收峰;磁飽和度約為40.4 emu/g，比Fe3O4-PEI復(fù)合微粒降低了33.3％。因此，多層復(fù)合型金磁微?？勺鳈z測(cè)體系的固相載體，制備免疫磁珠。
　　 3、免疫磁珠和酶標(biāo)

4、氯霉素的制備
　　 將多層復(fù)合型Fe3O4/Au微粒與氯霉素多克隆抗體結(jié)合得到免疫磁珠，偶聯(lián)反應(yīng)在25 min后基本結(jié)束，最佳pH為8.0，最佳抗體使用量為1200μg，且得到抗體的平均包被率約為27.27％。此外，采用高碘酸鈉氧化法制備了酶標(biāo)記氯霉素抗原(HRP-CAP)，結(jié)果顯示其濃度為0.413 mg/mL，酶活損失為8.55％，偶聯(lián)率為6.65。
　　 4、磁分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)體系的建立及在氯霉素檢測(cè)中的應(yīng)用探討<

5、br>　　 根據(jù)最佳制備條件，獲得免疫磁珠和酶標(biāo)氯霉素，將它們與氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合建立磁分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)體系，初步探究該體系檢測(cè)牛奶中氯霉素含量的可行性。研究結(jié)果顯示氯霉素含量在1 ng/mL-10 ng/mL范圍內(nèi)，氯霉素濃度與百分吸光度值有較好的線性關(guān)系，其回歸方程為y=-8.2501x+92.020(R2=0.9843)，IC50為5.1 ng/mL。此外，該檢測(cè)體系對(duì)甲砜霉素和氟甲砜霉素的交叉反應(yīng)率分別為1.3％和2.1％