氯霉素快速檢測(cè)方法的建立及其在食品安全中的應(yīng)用.pdf

1、本研究利用雜交瘤技術(shù)研制出氯霉素單克隆抗體,建立了氯霉素快速檢測(cè)方法，并在食品安全檢測(cè)中得到初步應(yīng)用。 本研究分別采用羰基二咪唑法和戊二醛法將氯霉素偶聯(lián)到蛋白載體上，制備出BSA-CAP和OVA-CAP，分別作為免疫抗原和包被抗原。用BSA-CAP免疫BALB/c小鼠，取免疫鼠脾淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0作融合實(shí)驗(yàn)，篩選出 6株能穩(wěn)定產(chǎn)生氯霉素抗體的雜交瘤細(xì)胞株，并制備出單克隆抗體，經(jīng)鑒定6株單抗亞型均為IgG1，效價(jià)在

2、1：107～1：109之間。 設(shè)計(jì)了直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法，并對(duì)包被條件、包被濃度、競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)時(shí)間等條件進(jìn)行了優(yōu)化，建立了完整的ELISA檢測(cè)方案。該方法的檢測(cè)時(shí)間在1.5h之內(nèi)，最低檢測(cè)限為0.05ng/ml，I50為0.9ng/ml，與其他幾種抗生素的交叉反應(yīng)均小于0.1％，優(yōu)于國(guó)家現(xiàn)有氯霉素殘留限量的檢測(cè)要求。 同時(shí)建立了檢測(cè)氯霉素的膠體金免疫層析方法。采用免疫競(jìng)爭(zhēng)法，將抗氯霉素單克隆抗體-膠體金結(jié)合物包被在膠體