動(dòng)物性食品中氨苯砜免疫快速檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、氨苯砜(dapsone，DDS)為砜類抑菌劑，大劑量使用時(shí)會(huì)顯示出較強(qiáng)的殺菌作用，常被用來(lái)預(yù)防和治療動(dòng)物疾病。但是氨苯砜的毒性較大，會(huì)引起血液系統(tǒng)反應(yīng)，會(huì)對(duì)某些器官造成一定的損害，最嚴(yán)重的甚至可以導(dǎo)致人體死亡，因此我國(guó)農(nóng)業(yè)部規(guī)定禁止在所有食品動(dòng)物中使用，且不得在動(dòng)物性食品中檢出;歐盟2377/90、37/2010也明確規(guī)定氨苯砜是禁用藥物。本文設(shè)計(jì)合成DDS人工抗原，制備出了針對(duì)DDS的多克隆抗體，初步建立了檢測(cè)DDS的dcELISA法

2、和GICA法，兩者對(duì)DDS的殘留進(jìn)行快速檢測(cè)都表現(xiàn)出較好的靈敏度和特異性。
　　利用重氮化法將DDS與牛血清白蛋白(BSA)進(jìn)行偶聯(lián)制備出免疫原DDS-BSA，利用戊二醛法將DDS與卵清蛋白(OVA)進(jìn)行偶聯(lián)制備出包被原DDS-OVA，采用過(guò)碘酸鈉法將DDS與HRP相連制備了酶標(biāo)抗原DDS-HRP。用免疫原DDS-BSA對(duì)健康的新西蘭大耳白兔進(jìn)行多點(diǎn)免疫。免疫三個(gè)月后，新西蘭大耳白兔產(chǎn)生的抗血清效價(jià)為1∶12800，將抗血清用Pr

3、oteinA-Sepharose4B凝膠柱親和層析法進(jìn)行純化，得到針對(duì)DDS的單一特異性抗體。
　　通過(guò)對(duì)包被抗體濃度及酶標(biāo)抗原稀釋濃度、封閉液、離子濃度、pH值及乙腈含量等條件進(jìn)行優(yōu)化，在最優(yōu)條件下，建立了DDS的直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法，該方法IC50為2.96μg/L，IC15為0.02μg/L，與二苯砜、4，4—二羥基二苯砜、磺胺和磺胺嘧啶等結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率分別為1.38％、0.75％、17.22％和11.17％，表明

4、此方法具有較高的特異性，板內(nèi)變異系數(shù)范圍為3.47％～12.12％，板間變異系數(shù)范圍為5.22％～12.16％，證明該法的穩(wěn)定性較好。牛奶需10倍稀釋、蜂蜜需5倍稀釋、豬肉和雞蛋需吹干后復(fù)溶，可有效消除基質(zhì)。設(shè)三個(gè)水平，結(jié)果ELISA回收率在75.45％～90.48％之間，通過(guò)常規(guī)的HPLC法對(duì)ELISA結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示R2為0.9937。證明，所建立的直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法可以用來(lái)對(duì)動(dòng)物源性食品中殘留的DDS進(jìn)行快速定量檢測(cè)。<