酪蛋白水解物中ACE抑制肽的分離及純化.pdf

1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）在高血壓的預(yù)防和調(diào)節(jié)方面起著重要作用，目前已經(jīng)從乳蛋白中分離出大量的ACE抑制肽。本課題以酪蛋白作為原料，通過雙酶水解，得到含有ACE抑制肽的水解液，之后以葡聚糖凝膠、毛細(xì)管電泳、反相高效液相色譜、液質(zhì)聯(lián)用等實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行分離和純化分析。
　　雙酶水解過程，先胃蛋白酶、后胰蛋白酶依次對酪蛋白進(jìn)行水解處理，制備 ACE抑制肽。水解液經(jīng)截留分子量為6Ku的超濾膜初步分離，再通過葡聚糖凝膠（Sephadex G-

2、15）進(jìn)一步純化，對所得組分分別進(jìn)行ACE活性的體外檢測，并計(jì)算ACE活性的半數(shù)抑制率（IC50值）。之后對樣品依次進(jìn)行如下分析：毛細(xì)管電泳分析肽譜，反相高效液相色譜（RP-HPLC）分析成分純度，質(zhì)譜聯(lián)用（Q-TOF LC/MS）檢測分子量范圍，化學(xué)方法檢測氨基酸組成，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析肽譜、檢測氨基酸序列。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雙酶水解產(chǎn)物的IC50值為560?g/mL；超濾流出物的IC50值為250μg/mL；Sephadex

3、G-15分離得到3個組分，組分1的IC50值為123.41μg/mL，含有19個肽段；組分2的IC50值為66.67μg/mL，含有14個肽段；組分3的IC50值為64.29μg/mL，含有5個肽段。Q-TOF LC/MS測得三個組分的分子量范圍為400～800u。對ACE抑制活性最高的組分3進(jìn)行反相高效液相色譜分析，結(jié)果顯示含有4個成分，其中有2個主成分。組分2經(jīng)過化學(xué)酸降解檢出纈氨酸、絲氨酸、脯氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天門冬