元素組在鉛暴露致神經(jīng)損傷中的作用研究.pdf

1、目的：本研究主要探討鉛暴露后海馬、皮質(zhì)和腦脊液變化的元素圖譜，同時初步闡明銅和銅轉(zhuǎn)運蛋白在鉛神經(jīng)毒性中銅蓄積的作用，以期為鉛中毒的防治提供理論依據(jù)。
　　方法：1動物模型建立21天雄性 SD大鼠80只隨機分為鉛暴露組和對照組，通過自由飲水方式染毒，鉛暴露組飲用含有200mg/L醋酸鉛。染毒時間分為3、6、9、12周。應(yīng)用Morris水迷宮進行神經(jīng)行為學測試。2細胞模型的建立大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系 C6，應(yīng)用0或10μmol·L-1醋

2、酸鉛處理24h，然后更換含有2μmol·L-1的氯化銅培養(yǎng)基，培養(yǎng)0、0.5、1、2、4、8h后收集細胞，CCK-8法檢測細胞存活率。3采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測鉛暴露后大鼠海馬、皮質(zhì)、腦脊液中15種元素的含量和C6細胞中鉛、銅的含量。4熒光實時定量PCR檢測鉛暴露后細胞中 CTR1、DMT1、CCS、ATOX1、COX17、ATP7A、ATP7B的mRNA表達。5激光共聚焦檢測鉛暴露后C6細胞中CTR1和ATP7A的表達。

3、　　結(jié)果：1實驗大鼠的一般情況：在染毒期間，所有實驗大鼠攝食和飲水量未見異常。飼養(yǎng)過程中，實驗大鼠體重正常增長，各組體重增加變化無差異。2鉛暴露第6周到第12周，大鼠的逃逸潛伏期與對照組比較顯著增長（P<0.05）。3鉛暴露后大鼠海馬、皮質(zhì)、腦脊液中主要差異元素組：鉛暴露后大鼠皮質(zhì)中主要差異元素包括 Ca、Fe、Cu；海馬中主要的差異元素包括 Na、Mg、Al、Cu、Zn；腦脊液中主要差異元素包括 Na、Al、Cu、Fe、V、Ni。銅在

4、暴露大鼠海馬、皮質(zhì)、腦脊液中均有顯著變化，是重要的差異元素。4鉛暴露導致 C6細胞內(nèi)銅蓄積：C6細胞鉛暴露24h后，細胞內(nèi)鉛和銅的濃度分別為0.19±0.01(μg/mg pro）和0.51±0.05（μg/mg pro），是對照組的1.98和1.23倍，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。C6細胞在含銅培養(yǎng)基培養(yǎng)0.5，1，2，4，8h后，銅含量都隨著時間的延長而上升，在0.5h，1h，2h和8h時，細胞中銅的濃度分別是對照組的1.12

5、、1.35、1.19、1.13倍（P<0.05）；其中，在培養(yǎng)1h后，鉛暴露組細胞銅吸收速率最快（P<0.05）。5銅轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白在鉛暴露所致銅蓄積中的作用：C6細胞在鉛暴露24h后，吸收銅0h時， CTR1和DMT1的 mRNA表達比對照組分別增加了12％和36%， ATP7AmRNA的表達降低了25%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；同時，激光共聚焦結(jié)果顯示鉛暴露24h后，C6細胞中 CTR1表達的熒光強度高于對照組， ATP7