鮮肉食品中四種食源菌污染的調(diào)查及沙門氏菌LAMP檢測(cè)方法的建立.pdf

1、沙門氏菌（Salmonella）、大腸桿菌(Escherich iaco li，E.coli) O157:H7、空腸彎曲菌（Campylobacter jejuni，Cj）和單核細(xì)胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytohenes，Lm）是當(dāng)前重要的四種食品源性病原菌（簡(jiǎn)稱食源菌）。為了解市售鮮肉食品中四種食源菌的污染狀況以及沙門氏菌的流行血清型及耐藥現(xiàn)狀，本研究對(duì)廣西4個(gè)城市的市售鮮肉食品進(jìn)行了四種食源菌污染的檢測(cè)，對(duì)Sa

2、lmonella分離株的進(jìn)行了血清型和耐藥性的分析，同時(shí)建立了一種Salmonella的LAMP快速檢測(cè)方法，為鮮肉食品進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估及Salmonella快速檢測(cè)技術(shù)提供支撐。
　　2014-2015年采集自南寧、玉林、欽州、百色的超市和自由市場(chǎng)銷售的豬肉、雞肉、牛肉和鴨肉共788份新鮮肉類樣品，參考食原菌檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室建立的PCR進(jìn)行Salmonella、E.coli O157:H7、Cj和Lm四種食源菌的分離

3、培養(yǎng)和鑒定;對(duì)分離到的111株沙門氏菌進(jìn)行血清型鑒定和16種常用抗生素的耐藥性試驗(yàn)，同時(shí)對(duì)氯霉素類、β-內(nèi)酰胺類、磺胺類、氨基糖苷類和四環(huán)素類共5類抗生素中的16種耐藥基因設(shè)計(jì)引物進(jìn)行耐藥基因PCR檢測(cè)和序列分析，并進(jìn)一步對(duì)耐藥表型與耐藥基因檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析;針對(duì)沙門菌屬保守基因invA設(shè)計(jì)LAMP引物組，并借助LA-320C實(shí)時(shí)濁度儀對(duì)LAMP反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，
　　借助熒光目視檢測(cè)試劑鈣黃綠素/MnC12指示反應(yīng)結(jié)果，同時(shí)

4、對(duì)建立的Salmonella-LAMP快速檢測(cè)方法進(jìn)行特異性、敏感性的試驗(yàn)以及對(duì)100份肉類食品樣品的檢測(cè)試驗(yàn)。
　　結(jié)果在788份市售鮮肉樣品中，Salmonella的檢出率最高(14.1％，111/788)，其后依次為E.coli O157:H7(9.0％，71/788)、Cj(6.2％，49/788)和Lm(1.3％，10/788);111株食源性Salmonella分離株中共檢測(cè)出了42種血清型另有3株未定型，其中優(yōu)勢(shì)血清

5、型為S.derby(25.2％，28/111)、S.agona(18.0％，20/111)和S.enteritidis(7.2％，8/111);分離株對(duì)環(huán)丙沙星最敏感，對(duì)磺胺異惡唑(66.7％)和四環(huán)素(63.9％)的耐藥率最高。耐受至少三種抗生素的菌株有68株(61.3％)，其中有6個(gè)菌株耐受至少10種抗生素。耐藥狀況呈現(xiàn)地區(qū)性差異，以欽州分離株的耐藥狀況最嚴(yán)重;111株Salmonella分離株中共檢測(cè)到10種耐藥基因，氯霉素類、β

6、-內(nèi)酰胺類、磺胺類、氨基糖苷類和四環(huán)素類5類抗生素中檢出率最高的耐藥基因分別為flo、blaTEM-I、sulⅡstrB和tetA，5類抗生素耐藥基因的檢出情況與耐藥表型的符合率分別是78.1％、96.2％、81.1％、70.7％和94.4％;建立的LAMP方法特異性強(qiáng)，只擴(kuò)增Salmonella，對(duì)32株不同血清型的Salmonella都可以擴(kuò)增，對(duì)6株非沙門菌屬的細(xì)菌不擴(kuò)增，檢測(cè)靈敏度為8×102copies/μL，比常規(guī)PCR的靈