多不飽和脂肪酸高產(chǎn)菌株的選育及發(fā)酵研究.pdf

1、多不飽和脂肪酸(PUFAs)具有維護膜結構、抑制心血管疾病、抗炎、防癌以及促進大腦發(fā)育、減肥、提高動物的產(chǎn)仔率和成活率等功能，在食品、醫(yī)藥、養(yǎng)殖、化妝品等行業(yè)中應用廣泛。深黃被孢霉是目前研究最廣泛，最有潛力實現(xiàn)PUFAs大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的微生物資源，但仍存在菌種產(chǎn)量低、發(fā)酵工藝不完善、油脂提取率低等問題。本研究圍繞提高PUFAs產(chǎn)量的核心問題，對PUFAs高產(chǎn)菌株的選育、微生物油脂最佳提取工藝、培養(yǎng)基組分及發(fā)酵條件的優(yōu)化進行了系統(tǒng)的研究

2、。主要得到以下研究結果:
　　1.本研究通過紫外線和亞硝基胍聯(lián)合誘變、乙酰水楊酸推理篩選，獲得高產(chǎn)菌株N0.1-112。菌株N0.1-112生長能力和產(chǎn)油能力較強，其生物量為24.71 g/L、油脂產(chǎn)量為20.02 g/L，PUFAs產(chǎn)量為4.67 g/L，分別比原始出發(fā)菌株提高202.45％、580.06％和267.72％，且遺傳穩(wěn)定。
　　2.本研究分別采用超聲波輔助酸熱提取法和超聲波微波聯(lián)合提取法兩種提取方法，對微生物

3、油脂的提取條件進行了研究，確定各自最佳的提取工藝。通過兩種工藝比較，最終確定超聲波微波聯(lián)合提取法為微生物油脂最佳提取方法。最佳工藝為:微波功率400W，微波時間3.7 min,超聲溫度30℃，超聲時間40.5 min，超聲功率498W，料液比1∶12.3(w/v)，在此條件下，微生物油脂的提取率達到92.24％，提取量達178.73±0.17 mg/g（濕菌）(P＜0.05)，是優(yōu)化前的1.65倍。
　　3.在單因素實驗結果基礎上

4、，通過B-B試驗設計對培養(yǎng)基組分和發(fā)酵條件進行了優(yōu)化，確定了最優(yōu)的培養(yǎng)基組分和發(fā)酵條件。最佳的發(fā)酵培養(yǎng)基組分分別為:2 g/L KH2PO4，2g/L檸檬酸鈉，116 g/L葡萄糖，10.8 g/L酵母浸膏與花生餅粉混合氮源，比例為3∶1(w/w)，30.8 mg/L Ca2+，96.8 mg/L Mg2+，在此條件下PUFAs產(chǎn)量達到6.27 g/L;最佳發(fā)酵條件組合分別為:初始pH值6.36，培養(yǎng)溫度28℃，接種量10％，裝液量11