OGDHC和SAMs對(duì)埃博霉素生物合成的影響.pdf

1、埃博霉素(epothilone)是一類由纖維堆囊菌(Sorangium cellulosum)產(chǎn)生的具有抗腫瘤活性的大環(huán)內(nèi)酯類化合物。與傳統(tǒng)的抗癌藥物紫杉醇的抗腫瘤機(jī)制一樣，但埃博霉素的分子結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、水溶性好、毒副作用較小、抗腫瘤譜較廣，能夠更好地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，是一種具有廣闊開發(fā)潛力的新型抗腫瘤化合物。雖然現(xiàn)在對(duì)這種抗腫瘤化合物的主要研究由提高發(fā)酵產(chǎn)量轉(zhuǎn)為臨床效果實(shí)驗(yàn)，但是對(duì)于在纖維堆囊菌中埃博霉素的生物合成關(guān)鍵酶的研究鮮有報(bào)道。

2、
　　本研究對(duì)埃博霉素生物合成中α-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體(OGDHC)和S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMs)進(jìn)行酶活檢測(cè)，分析酶活變化曲線和埃博霉素的生物合成曲線，并向培養(yǎng)基中添加酶的活性調(diào)節(jié)劑，分析在酶活力改變的情況下埃博霉素的生物量，并在基因水平上分析在不同條件下酶和埃博霉素的基因表達(dá)量。在酶活水平檢測(cè)中，分別添加OGDHC的抑制劑NaClO和H2O2來(lái)降低酶的活力，用SAMs的促進(jìn)劑對(duì)甲苯磺酸鈉（p-TSA-Na）和抑制劑吲哚

3、乙酸（IAA）來(lái)改變酶的活力。由酶活力曲線和埃博霉素產(chǎn)量曲線可知OGDHC和SAMs在埃博霉素的生物合成中有一定的作用。添加酶活力調(diào)節(jié)劑之后，NaClO和H2O2存在時(shí)，OGDHC的活性被抑制，同時(shí)埃博霉素的產(chǎn)量也顯著的降低；p-TSA-Na存在時(shí)，SAMs的活性升高，埃博霉素的產(chǎn)量也升高，當(dāng)SAMs的活性被IAA抑制時(shí)，埃博霉素的產(chǎn)量也受抑制，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，OGDHC和SAMs的活力與埃博霉素的產(chǎn)量呈正相關(guān)。在埃博霉素的生物合成中，O

4、GDHC和SAMs是重要的酶。在基因表達(dá)量的分析中，用硫酯酶（TE）的表達(dá)水平表征埃博霉素的表達(dá)水平，用OGDHC中E1(α-酮戊二酸脫氫酶，ogdh)的表達(dá)水平來(lái)表征OGDHC的表達(dá)水平，以16S rRNA為內(nèi)參基因，來(lái)分析OGDHC和SAMs在埃博霉素的合成過(guò)程中的轉(zhuǎn)錄情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TE的表達(dá)水平在發(fā)酵3、4天最高，OGDHC的抑制劑存在時(shí)，TE的表達(dá)水平降低，和埃博霉素的產(chǎn)量相呼應(yīng)。H2O2的添加使ogdh的表達(dá)大幅降低，但