效應(yīng)劑對(duì)關(guān)鍵酶和埃博霉素生物合成產(chǎn)量影響的研究.pdf

1、埃博霉素（Epothilone）是大環(huán)內(nèi)酯類新型抗腫瘤活性物質(zhì)，具有多種差異微小但功效相似的分子結(jié)構(gòu)，命名源自其結(jié)構(gòu)亞單位Epoxid（環(huán)氧）、Thiazole ring（噻唑環(huán)）、Ketone（酮基），其產(chǎn)品化的高效衍生物也有多種。
　　埃博霉素首次從纖維堆囊菌（Sorangium cellulosum）大量的次級(jí)代謝產(chǎn)物中被發(fā)現(xiàn)并報(bào)道，能有效遏止微管解聚，抗癌機(jī)制與紫杉醇相似，但是埃博霉素的優(yōu)勢(shì)有很多，分子具有相對(duì)簡(jiǎn)單的結(jié)構(gòu)，

2、具有可溶解于水，癌細(xì)胞種類選擇性廣、活性強(qiáng)、經(jīng)改造的衍生物毒副作用明顯減小、面對(duì)耐受性腫瘤細(xì)胞也具有較高的抗癌活性等一系列優(yōu)點(diǎn)，研究和應(yīng)用價(jià)值不可小覷。
　　丙酮酸激酶（PK）、S-腺苷甲硫氨酸合成酶（SAMS）和α-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體（OGDHC）這三種關(guān)鍵酶被認(rèn)為在生物合成埃博霉素的過程中至關(guān)重要，維生素K3（VK3）和果糖-1,6-二磷酸（FDP）是 PK的抑制劑和激活劑；次氯酸鈉（NaClO）和雙氧水（H2O2）是OGD

3、HC的抑制劑、對(duì)甲苯磺酸鈉（p-TSA-Na）和吲哚乙酸（IAA）對(duì)SAMs分別具有激活和抑制效果。
　　通過測(cè)定并描述關(guān)鍵酶比活力、埃博霉素生物合成的產(chǎn)量、發(fā)酵周期內(nèi)菌體干重、培養(yǎng)基pH值變化規(guī)律和消耗還原糖變化趨勢(shì)、對(duì)比單位質(zhì)量菌體合成埃博霉素量，借助Q-PCR技術(shù)獲得目的基因相對(duì)定量的倍數(shù)關(guān)系，研究效應(yīng)劑對(duì)關(guān)鍵酶和埃博霉素產(chǎn)量的改觀。
　　實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)四種抑制劑和兩種激活劑對(duì)上述參數(shù)的影響程度不同，對(duì)比發(fā)現(xiàn)IAA和VK3的

4、抑制效果明顯且是有限度的，NaClO和H2O2產(chǎn)生全面強(qiáng)烈的抑制效果，打破菌體自然生長變化的趨勢(shì)。p-TSA-Na的綜合激活效果比FDP更優(yōu)越。
　　埃博霉素生物合成產(chǎn)量與對(duì)甲苯磺酸鈉濃度1～32mmol/L范圍內(nèi)呈正相關(guān)關(guān)系，在4～16mmol/L范圍內(nèi)最明顯，充分說明添加對(duì)甲苯磺酸鈉與埃博霉素生物合成產(chǎn)量提高有密切關(guān)聯(lián)。
　　后續(xù)實(shí)驗(yàn)證明，在發(fā)酵接種時(shí)，對(duì)甲苯磺酸鈉濃度達(dá)到24mmol/L時(shí)，埃博霉素產(chǎn)量出現(xiàn)最大的增進(jìn)效