效應(yīng)劑對關(guān)鍵酶和埃博霉素生物合成產(chǎn)量影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、埃博霉素(Epothilone)是大環(huán)內(nèi)酯類新型抗腫瘤活性物質(zhì),具有多種差異微小但功效相似的分子結(jié)構(gòu),命名源自其結(jié)構(gòu)亞單位Epoxid(環(huán)氧)、Thiazole ring(噻唑環(huán))、Ketone(酮基),其產(chǎn)品化的高效衍生物也有多種。
  埃博霉素首次從纖維堆囊菌(Sorangium cellulosum)大量的次級代謝產(chǎn)物中被發(fā)現(xiàn)并報道,能有效遏止微管解聚,抗癌機(jī)制與紫杉醇相似,但是埃博霉素的優(yōu)勢有很多,分子具有相對簡單的結(jié)構(gòu),

2、具有可溶解于水,癌細(xì)胞種類選擇性廣、活性強(qiáng)、經(jīng)改造的衍生物毒副作用明顯減小、面對耐受性腫瘤細(xì)胞也具有較高的抗癌活性等一系列優(yōu)點,研究和應(yīng)用價值不可小覷。
  丙酮酸激酶(PK)、S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)和α-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體(OGDHC)這三種關(guān)鍵酶被認(rèn)為在生物合成埃博霉素的過程中至關(guān)重要,維生素K3(VK3)和果糖-1,6-二磷酸(FDP)是 PK的抑制劑和激活劑;次氯酸鈉(NaClO)和雙氧水(H2O2)是OGD

3、HC的抑制劑、對甲苯磺酸鈉(p-TSA-Na)和吲哚乙酸(IAA)對SAMs分別具有激活和抑制效果。
  通過測定并描述關(guān)鍵酶比活力、埃博霉素生物合成的產(chǎn)量、發(fā)酵周期內(nèi)菌體干重、培養(yǎng)基pH值變化規(guī)律和消耗還原糖變化趨勢、對比單位質(zhì)量菌體合成埃博霉素量,借助Q-PCR技術(shù)獲得目的基因相對定量的倍數(shù)關(guān)系,研究效應(yīng)劑對關(guān)鍵酶和埃博霉素產(chǎn)量的改觀。
  實驗發(fā)現(xiàn)四種抑制劑和兩種激活劑對上述參數(shù)的影響程度不同,對比發(fā)現(xiàn)IAA和VK3的

4、抑制效果明顯且是有限度的,NaClO和H2O2產(chǎn)生全面強(qiáng)烈的抑制效果,打破菌體自然生長變化的趨勢。p-TSA-Na的綜合激活效果比FDP更優(yōu)越。
  埃博霉素生物合成產(chǎn)量與對甲苯磺酸鈉濃度1~32mmol/L范圍內(nèi)呈正相關(guān)關(guān)系,在4~16mmol/L范圍內(nèi)最明顯,充分說明添加對甲苯磺酸鈉與埃博霉素生物合成產(chǎn)量提高有密切關(guān)聯(lián)。
  后續(xù)實驗證明,在發(fā)酵接種時,對甲苯磺酸鈉濃度達(dá)到24mmol/L時,埃博霉素產(chǎn)量出現(xiàn)最大的增進(jìn)效

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