水產(chǎn)品中副溶血弧菌的分離鑒定及部分菌株的耐藥性研究.pdf

1、副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,簡稱V.p),又稱嗜鹽菌,屬于弧菌科,弧菌屬。目前在細菌性食物中毒中,由副溶血性弧菌引起的比例比較高,其危害程度也是很大的,僅次于大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌,該菌常存在于海水、海產(chǎn)品、海底沉積物、熟肉及鹽漬食品中,主要引起人的食物中毒,表現(xiàn)為嘔吐、急性腹瀉,在東南亞、日本、美國及我國臺灣地區(qū)比較多見,在我國沿海地區(qū)食物中毒中也是最常見的致病菌。隨著人們生活水平的提高,全

2、球?qū)λa(chǎn)品安全性更加重視,特別是近幾年來,由于海產(chǎn)品在內(nèi)地城市盛行,內(nèi)地水產(chǎn)品安全事件也頻繁發(fā)生,危害程度也日益嚴重,已經(jīng)引起人們的高度重視。本研究共收集副溶血性弧菌可疑陽性病料30份,共分離出30株疑似菌株,并對所分離的疑似菌株進行了形態(tài)學觀察、生化鑒定、血清學分型、耐鹽性試驗,并對其中5株在分子水平上進行了16SrRNA序列分析,同時對不同血清型的6個本地株進行了耐藥性試驗。以期為進一步研究副溶血性弧菌感染的臨床治療和公共衛(wèi)生學意義

3、提供參考依據(jù),同時對現(xiàn)實生產(chǎn)預防和治療副溶血性弧菌都具有指導意義。
　　 本課題主要研究內(nèi)容:
　　 (一)收集副溶血性弧菌可疑陽性病料30份:小龍蝦樣品16份,魚類樣品10份,貝類樣品4份(這些樣品來自鄭州地區(qū)不同海產(chǎn)品市場隨機取樣所得),進行前增兇培養(yǎng),并用TCBS培養(yǎng)基和科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基進行選擇性分離培養(yǎng),共分離出30株疑似菌株。通過對30株疑似菌株進行形態(tài)特征、培養(yǎng)特性等觀察及用全自動細菌鑒定分析儀(VITE

4、K-32)進行生化鑒定,初步判定30株疑似菌均為副溶血性弧菌。
　　 (二)檢測本地流行株的血清型,不僅對血清流行病學具有一定的意義,而且在對副溶血性弧菌引起的疾病的特異性免疫診斷與防疫方面也具有一定的參考價值。本研究參照GB/T478917—2003技術(shù)規(guī)程,采用玻片凝集方法,用標準血清對30株分離菌進行了血清學試驗。結(jié)果表明測試的30株副溶血性弧菌主要分屬于01和05兩個血清群,分別占60％(18/30)和40％(12/30

5、)。30株試驗菌共分6種血清型:01:K3、01:K4、01:K6、01:K7、05:K9、05:K4。
　　 (三)16SrRNA基因序列分析已經(jīng)成為細菌種屬鑒定和分類的標準方法。本研究選取5株代表性菌株(小龍蝦病料分離出的2株、魚類病料分離出的2株、貝類病料分離山的1株),通過設(shè)計上游引物(5’-GACTCAACACAAGAAGAGATGC-3’),下游引物(5’-ATGCGTGACATCCCAGAAC-3’),用PCR方法

6、分別克隆了其16SrRNA基因序列,根據(jù)細菌系統(tǒng)發(fā)育學的研究參考相關(guān)文獻,采用DNA—Star中的MEGAversion軟件,依靠Kimura2-PameterDistance分析方法對疑似菌株和己發(fā)表菌株進行分析比較,用Neighbor-Joining構(gòu)建分離菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹,結(jié)果表明所測序列與己發(fā)表的副溶血性弧菌標準菌株的16SrRNA序列具有高達99％的相似性。對比弧菌屬相關(guān)菌株的16SrRNA序列和對分離株進行系統(tǒng)發(fā)育樹分析,確