海產(chǎn)品中副溶血弧菌的分子鑒定與分型.pdf

1、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)為革蘭氏陰性的短桿菌,常存在魚類和貝類等海產(chǎn)品中,分布于海岸線等世界各地.在沿海地區(qū)和國(guó)家,該菌為首要的病原引起食物中毒之一.此菌主要通過(guò)消化道感染,患者出現(xiàn)腹瀉、腹部痙攣、惡心、嘔吐、發(fā)熱,甚至脫水、昏迷等癥狀,副溶血弧菌引起的食物中毒多發(fā)生在夏季節(jié).流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明,該病主要因誤食含該病原菌污染或處理不當(dāng)?shù)暮．a(chǎn)品而引起.但由于該菌在海產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中可通過(guò)各種途徑進(jìn)

2、入成品食品中,在多種海產(chǎn)品成品中存在,對(duì)消費(fèi)者健康構(gòu)成潛在威脅.因此,建立副溶血弧菌的快速簡(jiǎn)便的鑒定和分子分型方法,對(duì)于開(kāi)展海產(chǎn)品生產(chǎn)加工過(guò)程中副溶血弧菌污染源調(diào)查和控制,提高食品的微生物衛(wèi)生質(zhì)量具有重要意義.以具有副溶血弧菌種特異性的不耐熱溶血素基因(tl)和旋轉(zhuǎn)酶B(gyrB)為靶目標(biāo),建立雙重聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法以鑒別弧菌屬中的副溶血弧菌.雙重PCR方法檢測(cè)Vp標(biāo)準(zhǔn)株,均有高度靈敏性和特異性.進(jìn)行雙重PCR檢測(cè),可出現(xiàn)2個(gè)條

3、帶,其中1條為gyrB基因的特征性條帶(285 bp),另一條為tl基因片段(450 bp),對(duì)人工污染蝦肉醬的6 h預(yù)增菌培養(yǎng),副溶血弧菌的檢測(cè)底限為2.5×10<'0>~10<'1>CFU/g.建立的雙重PCR法可用于海產(chǎn)品中副溶血弧菌的特異性鑒定.我們用此方法檢測(cè)了182份新鮮和冷凍海產(chǎn)品,對(duì)其中46個(gè)在選擇性平板上疑似菌落進(jìn)行了二重PCR和生化鑒定,有32株為副溶血弧菌,這些分離株中沒(méi)有擴(kuò)增出tdh基因.本研究還初步建立了用于追