水產(chǎn)品中副溶血性弧菌生長(zhǎng)異質(zhì)性的研究.pdf

1、副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）是水產(chǎn)品中一類對(duì)人類具有高致病性的主要食源性桿菌，對(duì)VP進(jìn)行量化風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估（Quantitative Microbial Risk Assessment）可以有效預(yù)防和控制水產(chǎn)品中致病性VP的污染，保證食品安全。而量化微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估需要科學(xué)的構(gòu)建VP的生長(zhǎng)模型，充分考慮影響其生長(zhǎng)異質(zhì)性的因素,包括溫度、鹽度、來源、介質(zhì)以及其內(nèi)在基因型等。不同菌株在同一實(shí)驗(yàn)環(huán)境下的生長(zhǎng)情況

2、展現(xiàn)了多菌株復(fù)合體的生長(zhǎng)異質(zhì)性，基于不同影響因素構(gòu)建的多菌株生長(zhǎng)宏模型，將為開展鑒定食源性致病菌生長(zhǎng)異質(zhì)性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供更準(zhǔn)確的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和生長(zhǎng)模型。因此研究VP的生長(zhǎng)異質(zhì)性有助于我們探索其菌株特異性的內(nèi)因與外因，從而更為全面的評(píng)估VP給食品安全性帶來的風(fēng)險(xiǎn)。因此，本文旨在：1）研究溫度及鹽度對(duì)50種不同的VP菌株生長(zhǎng)異質(zhì)性帶來的影響2）研究不同的來源對(duì)VP的生長(zhǎng)異質(zhì)性所造成的影響3）進(jìn)一步研究基因分型對(duì)VP生長(zhǎng)的內(nèi)在效應(yīng)4）探究不同的培養(yǎng)

3、介質(zhì)對(duì)VP生長(zhǎng)異質(zhì)性的影響。本課題主要研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下：
　　1.基于純培養(yǎng)基中副溶血性弧菌生長(zhǎng)異質(zhì)性的研究
　　本研究對(duì)不同來源和不同基因型的50種副溶血性弧菌菌株，分別在4個(gè)溫度梯度（10℃，20℃，30℃，37℃）和5個(gè)鹽度梯度（0.5％，3％，5%，7％，9％）下的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特征進(jìn)行了評(píng)估。通過自動(dòng)比濁系統(tǒng)Bioscreen描繪VP的生長(zhǎng)曲線，并利用Modified Gompertz模型計(jì)算出其在不同環(huán)境組合的

4、最大比生長(zhǎng)速率，進(jìn)而比較得出溫度及鹽度這兩種重要的環(huán)境因素，其影響程度不盡相同：低溫對(duì)于最大生長(zhǎng)速率μmax降低的影響要大于高NaCl濃度，因此在鹽性環(huán)境中的腌制食品建議應(yīng)保存在低于10℃以下的溫度環(huán)境中，這樣可以保證副溶血性弧菌菌株全部失活；同時(shí)證明了37℃和3%氯化鈉濃度組合是副溶血性弧菌最佳生長(zhǎng)條件的結(jié)論。進(jìn)一步分析最大生長(zhǎng)速率μmax的變異系數(shù)發(fā)現(xiàn)，隨著處于活化范圍內(nèi)的溫度及鹽度等生長(zhǎng)條件變得越來越惡劣，其菌株的生長(zhǎng)異質(zhì)性也會(huì)增

5、大。對(duì)比不同來源的菌株分類可知，淡水養(yǎng)殖產(chǎn)品中的副溶血性弧菌菌株比海水養(yǎng)殖產(chǎn)品中的菌株的變異情況更明顯。另外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，基因異質(zhì)性也會(huì)影響副溶血性弧菌菌株的生長(zhǎng)異質(zhì)性，tlh+/tdh+/trh–的基因型生長(zhǎng)異質(zhì)性的變化程度最大，因此在臨床副溶血性弧菌菌株的食品安全控制中，建議應(yīng)更多地注意與高致病性和高生長(zhǎng)異質(zhì)性相關(guān)的tlh+/tdh+/trh–的基因型?？傊狙芯恐荚陬A(yù)防微生物學(xué)及微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中加入菌株生長(zhǎng)異質(zhì)性的影響因素，有

6、利于促進(jìn)學(xué)科的完善，提高評(píng)估的精確性；同時(shí)本實(shí)驗(yàn)的研究發(fā)現(xiàn)為自然條件下副溶血性弧菌的辨別及預(yù)防提供了科學(xué)的指導(dǎo)意見，對(duì)于實(shí)驗(yàn)條件下菌株的選育具有十分重要的參考意義。
　　2.基于三文魚中副溶血性弧菌生長(zhǎng)異質(zhì)性的研究
　　本實(shí)驗(yàn)采集3株分別來自于淡水、海水和臨床的副溶血性弧菌菌株，在無菌三文魚樣本中進(jìn)行培養(yǎng)并貯藏于6個(gè)不同溫度（4，7，10，15，25，30℃）下，采用Modified Gompetz生長(zhǎng)模型及Modified

7、 Baranyi失活模型進(jìn)行擬合得到生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)，對(duì)其進(jìn)行生長(zhǎng)異質(zhì)性的分析。結(jié)果表明溫度對(duì)VP的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)行為產(chǎn)生十分顯著的影響，溫度越低其最大生長(zhǎng)速率越低；來源同樣影響副溶血性弧菌的生長(zhǎng)變異性，淡水菌株的生長(zhǎng)異質(zhì)性比海水菌株及病人菌株的生長(zhǎng)異質(zhì)性要大；但溫度對(duì)VP生長(zhǎng)的影響比來源大；在失活狀態(tài)下三株菌的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)行為差異性極顯著，同樣說明環(huán)境越惡劣，其生長(zhǎng)變異性越大。本研究著重強(qiáng)調(diào)了三文魚中失活狀態(tài)下的VP菌株也需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的量

8、化，在實(shí)際生產(chǎn)過程中有助于更好的預(yù)防致病性VP菌株對(duì)食品安全構(gòu)成的威脅，保證食品的食用安全。3.副溶血性弧菌在兩種不同介質(zhì)中（蝦及三文魚）生長(zhǎng)異質(zhì)性的比較分析
　　本研究第一部分實(shí)驗(yàn)利用VP菌株ATCC33847(tlh+/tdh+/trh–)在六個(gè)溫度梯度下(4℃、7℃、10℃、15℃、25℃、30℃)分別在蝦和三文魚兩種介質(zhì)中進(jìn)行培養(yǎng),利用Modified Gompertz模型及Modified Baranyi模型分別進(jìn)行生長(zhǎng)

9、曲線擬合來計(jì)算最大生長(zhǎng)速率及致死速率，探究VP在蝦和三文魚兩種培養(yǎng)介質(zhì)下的生長(zhǎng)異質(zhì)性。結(jié)果表明介質(zhì)對(duì)VP生長(zhǎng)異質(zhì)性的影響十分顯著；環(huán)境越惡劣，在不同培養(yǎng)介質(zhì)中VP的生長(zhǎng)差異性也越大；另外在失活狀態(tài)下的致死速率比較揭示了溫度降低的影響對(duì)三文魚中培養(yǎng)的副溶血性弧菌的影響比在蝦中的弱。利用Belehradek方程作為VP生長(zhǎng)的二級(jí)模型得到該株菌在蝦中及三文魚中最大比生長(zhǎng)速率及延滯時(shí)間的系數(shù)，表明在生長(zhǎng)狀態(tài)下，在蝦中培養(yǎng)的菌株比在三文魚中生長(zhǎng)的