上海地區(qū)海產品中副溶血弧菌的分離鑒定、分子分型及tdh基因的克隆表達.pdf

1、副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus，VP）廣泛分布于沿岸海水、海底沉積物及蝦類，蟹類和貝類等海產品中，屬革蘭陰性短桿菌，有致病菌株和非致病菌株之分。致病菌株可引起人類腹瀉、惡心、嘔吐、腹部痙攣，嚴重的可以引起昏迷、脫水甚至死亡。因此，建立靈敏快速的檢測方法，了解副溶血弧菌在市售水產品的分布情況，對于食品衛(wèi)生檢測意義重大。
　　為研究副溶血弧菌流行情況及毒力基因的分布情況，從上海部分農貿市場及海產品批發(fā)市場采集

2、樣品183份，共鑒定出弧菌疑似株195株?；诳醇一騡yrB測序，將195株菌株確定到種的水平，包括副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）菌株137株（占70.3％）、溶藻弧菌（Vibrioalginolyticus）24株（占12.4％）、創(chuàng)傷弧菌(Vibriovulnificus)13株（占6.7％）和納瓦拉孤菌（Vibrionavarrensis）3株（占1.6％）。選取副溶血弧菌的4種主要毒力因子:耐熱直接

3、溶血素（tdh）、耐熱相關溶血素（trh）和Ⅲ型分析系統結構蛋白基因（vcrD1和vcrD2），進行PCR檢測。結果顯示，vcrD1檢出率為100％，其它3種基因分別為tdh(1.5％)，trh(0％)，vcrD2(0.74％)。
　　采用ERIC-PCR方法對2011～2013年分離的副溶血弧菌菌株及標準株基因組DNA進行分型，結果顯示副溶血弧菌采用此種分型方法能得到多態(tài)性較好的指紋圖譜，能擴增出2至14個大小在100bp到40

4、00bp之間的條帶，將137株分為6群和16類，不同月份及來源樣品有聚類趨勢。分型結果與菌株的致病力有一定的相關性。ERIC-PCR分型快速簡單，且較其他分子分型技術具備不要求模板序列已知而直接進行擴增的優(yōu)點，適用于大量副溶血弧菌的快速分型研究，能夠為副溶血弧菌食物中毒事件的預防和流行病學調查提供參考依據。
　　對副溶血弧菌耐熱直接溶血素基因（tdh）進行克隆、原核表達與免疫活性分析。結果表明，重組TDH蛋白主要以包涵體形式在大腸