刀額新對蝦過敏原蛋白的提取純化及檢測技術(shù)研究.pdf

1、蝦及其制品以其較高的營養(yǎng)價值和獨特風味，越來越受到人們的青睞，但由于蝦是極易致敏的食物之一，嚴重威脅著人類的健康，因此開展蝦過敏原蛋白的相關(guān)研究具有十分重要的經(jīng)濟和社會效益。
　　本研究選用刀額新對蝦（Metapenaeus ensis）作為研究對象，應(yīng)用硫酸銨分段鹽析法從蝦蛋白粗提液中初步提取刀額新對蝦過敏原蛋白，再用 Sephadex G-100凝膠柱層析對初提物進行純化。結(jié)果顯示：pH6.54，飽和度為40％的硫酸銨分段鹽析

2、沉淀組分經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析得到單一洗脫峰，經(jīng)SDS-PAGE電泳得到1個電泳條帶，蛋白相對分子質(zhì)量約為36.1 kDa。經(jīng)斑點免疫法檢測該組分顯示具有強烈的過敏原活性，確定了從蝦提取過敏原蛋白的工藝參數(shù)。用純化的蝦過敏原蛋白，對6-8周齡的雌性Balb/c小鼠短程免疫，間接ELISA法檢測抗血清效價及其交叉反應(yīng)性，結(jié)果顯示，該短程免疫法僅用19天便可制得效價為1:6400的抗血清；該抗血清對南美白對蝦、黑斑口蝦姑和

3、中國明對蝦的過敏原無交叉反應(yīng)性；該抗血清經(jīng)硫酸銨沉淀、DEAE-Cellulose DE-52層析和Sephadex G-150層析分離純化，最終獲得刀額新對蝦過敏原的多克隆抗體。用間接ELISA法的原理設(shè)計刀額新對蝦過敏原的檢測方法，確定了蝦過敏原的檢測區(qū)間為0.32μg/mL-16μg/mL。分離純化了刀額新對蝦過敏原蛋白，制備了小鼠抗蝦過敏原蛋白的多克隆抗體，并建立了蝦過敏原的檢測方法，為蝦及其制品中致敏物質(zhì)的檢測技術(shù)提供了可行的