mba論文牛乳過敏原β乳球蛋白制備、中試生產(chǎn)設(shè)計(jì)及其致敏性的細(xì)胞學(xué)評估pdf

1、 分類號： 密級： UDC： 學(xué)號： 417214914120 南 昌 大 學(xué) 專 業(yè) 學(xué) 位 碩 士 研 究 生 學(xué) 位 論 文 牛乳過敏原 β-乳球蛋白制備、中試生產(chǎn)設(shè)計(jì)及其致敏性的細(xì)胞學(xué)評估 Purification, pilot-scale production desig

2、n of bovine allergen β-lactoglobulin and cytological evaluation of allergenicity in vitro 鄒麗 培養(yǎng)單位（院、系） ：南昌大學(xué)食品學(xué)院 指導(dǎo)教師姓名、職稱：李欣 副教授 指導(dǎo)教師姓名、職稱：許春蘭 教授級高工 專業(yè)學(xué)位種類：工程碩士 專業(yè)領(lǐng)域名稱：食品工程 論文答辯日期：2016 年 5 月 答辯委員會主席： 評閱人

3、： 2016 年 5 月 30 日 摘要 IV 摘 要 食物過敏是食物中某種成分 （變應(yīng)原或過敏原） 刺激人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生一種異常的病理性免疫應(yīng)答。 八大類食物過敏原中牛乳過敏較為普遍， 而 β-乳球蛋白是牛乳主要的過敏原之一， 由反芻動物乳腺上皮細(xì)胞合成，含量約占乳清蛋白總量的 55%，人乳中則不含有。 本文采用制備型反相高效液相色譜獲得高純度的牛乳過敏原 β-乳球蛋白， 對其進(jìn)行輻照協(xié)同超聲非熱加工處理

4、。 通過光譜學(xué)方法表征不同加工處理后過敏原的結(jié)構(gòu)特征，在此基礎(chǔ)上，利用人外周血嗜堿性粒細(xì)胞 KU812，建立體外細(xì)胞模型評估蛋白致敏性變化。文章關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)方法、現(xiàn)象結(jié)果及結(jié)論表述如下。 1.建立制備型反相高效液相色譜儀（C18）分離純化牛乳過敏原 β-乳球蛋白的方法，小試實(shí)驗(yàn)僅用 25 min，經(jīng) SDS-PAGE 鑒定，得到的 β-乳球蛋白純度達(dá)到 98.2%，得率為 32.25%?；谛≡噮?shù)進(jìn)行十倍放大的中試工藝設(shè)計(jì)，選取C18

5、色譜柱（直徑 25 mm，長度 250 mm） ，上樣量 100 mL，體積 10 mg/mL，并完成設(shè)備的選型，繪制工藝流程圖和設(shè)備流程圖。 2.牛乳過敏原 β-乳球蛋白經(jīng)超聲（40KHz，300W，30min）和輻照（5 kGy）協(xié)同處理，分為四組：原蛋白組，輻照組；先超聲后輻照組，先輻照后超聲組。加工后蛋白發(fā)生不同程度的聚合， 一級和空間結(jié)構(gòu)均發(fā)生不同程度的改變。 在蛋白聚合過程中，二級結(jié)構(gòu)從無序轉(zhuǎn)為有序狀態(tài)，Trp19 基團(tuán)向

6、Arg124 運(yùn)動，熒光強(qiáng)度被部分猝滅，疏水基團(tuán)包埋，熒光強(qiáng)度降低。并且，加工蛋白三級結(jié)構(gòu)也發(fā)生改變，二硫鍵 Cys106-Cys119 可能發(fā)生斷裂，既增強(qiáng)了巰基含量又有利于蛋白聚合。間接競爭 ELISA 法測定加工 β-乳球蛋白與 IgG 的結(jié)合，結(jié)果顯示結(jié)合能力明顯降低，蛋白的部分抗原決定簇被破壞，降低了蛋白抗原性。 3.選取對數(shù)生長期 KU812 細(xì)胞（l.0× l06 個/mL）進(jìn)行體外細(xì)胞學(xué)評估實(shí)驗(yàn)，檢測 KU81

7、2 細(xì)胞脫顆粒釋放的生物活性介質(zhì)：β-HEX、組胺、TNF-α、IL-6 以及胞內(nèi) Ca2+濃度變化。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)原蛋白組檢測到的活性物質(zhì)含量最高， 外鈣內(nèi)流現(xiàn)象最明顯。 Western Blot 法檢測 KU812 細(xì)胞激發(fā)后信號通路的 Lyn、 Syk、 NF-κB以及 MAPK 家族蛋白的表達(dá)情況，原蛋白組信號通路上游和下游的磷酸化蛋白含量都最高， 而加工蛋白的磷酸化程度較低。 上游信號通路的源頭激酶 Lyn、 Syk被抑制可以進(jìn)一