生姜蛋白酶的雙水相萃取純化技術(shù)研究.pdf

1、本研究以生姜為原料，于2009-2011年在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院功能食品研究室進(jìn)行，主要研究了運(yùn)用雙水相萃取技術(shù)（ATPE）分離提取生姜中生姜蛋白酶的提取條件，分析了雙水相成相因素對生姜蛋白酶萃取的影響，利用該技術(shù)得到了生姜蛋白酶的等電點(diǎn)及三步雙水相萃取純化生姜蛋白酶的流程。主要結(jié)果如下：
　　 ⑴單鹽雙水相體系的建立。最佳PEG分子量為4000，PEG濃度為30％，選擇鹽種類為硫酸銨，濃度為10％，體系pH為8.0，

2、操作溫度選擇室溫，樣品加入量為3mL。此雙水相體系的生姜蛋白酶上相酶活力回收和純化倍數(shù)都最高，分別可達(dá)87.24％和1.85。
　　 ⑵緩沖鹽雙水相體系的建立。最佳PEG分子量為4000，PEG濃度為20％，緩沖鹽pH為6.5，緩沖鹽濃度為10％，此雙水相體系的上相酶活回收和純化倍數(shù)都最高，分別達(dá)94.99％和1.86。
　　 ⑶PEG/(NH4)2SO4 雙水相體系及PEG/(NaH2PO4-Na2HPO4)雙水相體系

3、的各相平衡關(guān)系的線性方程。各分子量PEG/(NH4)2SO4相平衡關(guān)系的線性方程分別為：y=613.33e-0.2139X；y=260.66e-0.2036X；y=178.46e-0.1969X；y=79.91e-0.174X；y=124.52e-0.2492X；y=282.31e-0.4302x。各分子量PEG/(NaH2PO4-Na2HPO4)相平衡關(guān)系的線性方程分別為：y=327.41e-0.2706x；y=170.9e-0.24

4、7x；y=105.9e-0.2508x；y=91.385e-0.3029X；y=106.04e-0.4173x；y=73.272e-0.3836x。
　　 ⑷交錯(cuò)分配法（cross partitioning）測定生姜蛋白酶的等電點(diǎn)（pI）。通過交錯(cuò)分配法測定生姜蛋白酶的等電點(diǎn)，得出生姜蛋白酶的等電點(diǎn)有兩個(gè)：即4.1和6.4，說明生姜蛋白酶含有兩個(gè)組分而且屬于酸性蛋白酶。
　　 ⑸三步雙水相萃取提取和純化生姜蛋白酶流程的建