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1、本論文制備了識(shí)別苯脲類(lèi)除草劑的單克隆抗體,建立了一種檢測(cè)苯脲類(lèi)除草劑的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)方法(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA)。通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助分子模擬(Computer-AidedMolecularModeling,CAMM)及定量結(jié)構(gòu)-效應(yīng)關(guān)系(QuantitativeStructure-ActivityRelationship,QSAR)的方法,系統(tǒng)研究了抗原對(duì)抗體識(shí)別的影響。
將
2、半抗原與牛血清蛋白(BovineSerumAlbumin,BSA)偶聯(lián),獲得免疫原免疫小鼠。將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合獲得雜交瘤細(xì)胞。通過(guò)有限稀釋克隆法克隆并篩選得到最優(yōu)的單克隆抗體。優(yōu)化包被量、抗體量、酶標(biāo)二抗量、封閉液等條件,建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,可同時(shí)檢測(cè)12種苯脲類(lèi)除草劑。針對(duì)不同待測(cè)物,該方法的靈敏度為1.7-920.7ng/mL,檢出限為0.4-76.9ng/mL。對(duì)海河水進(jìn)行預(yù)處理,并使用該ELISA方法檢測(cè)
3、其中添加的苯脲類(lèi)除草劑,回收率在77.05-121.71%之間,說(shuō)明該方法準(zhǔn)確可靠。
使用CAMM結(jié)合QSAR方法分析了苯脲類(lèi)除草劑分子結(jié)構(gòu)、亞結(jié)構(gòu)及其性質(zhì)對(duì)抗體識(shí)別的影響,發(fā)現(xiàn):(1)該小分子抗原的疏水性對(duì)抗體識(shí)別有極為重要的影響,且其貢獻(xiàn)與抗體識(shí)別效率呈二次相關(guān);(2)抗原分子的最低未占據(jù)分子軌道能量ELUMO對(duì)抗體識(shí)別有重要影響;(3)通常認(rèn)為,用于連接載體蛋白的基團(tuán)較少暴露在免疫反應(yīng)環(huán)境中,故對(duì)抗體識(shí)別貢獻(xiàn)不大,所以在
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