苯脲類除草劑酶聯(lián)免疫檢測方法的研究.pdf

1、本論文制備了識別苯脲類除草劑的單克隆抗體，建立了一種檢測苯脲類除草劑的酶聯(lián)免疫吸附檢測方法(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA)。通過計算機輔助分子模擬(Computer-AidedMolecularModeling，CAMM)及定量結(jié)構(gòu)-效應(yīng)關(guān)系(QuantitativeStructure-ActivityRelationship,QSAR)的方法，系統(tǒng)研究了抗原對抗體識別的影響。
　　將

2、半抗原與牛血清蛋白(BovineSerumAlbumin，BSA)偶聯(lián)，獲得免疫原免疫小鼠。將小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合獲得雜交瘤細胞。通過有限稀釋克隆法克隆并篩選得到最優(yōu)的單克隆抗體。優(yōu)化包被量、抗體量、酶標(biāo)二抗量、封閉液等條件，建立了間接競爭ELISA方法，可同時檢測12種苯脲類除草劑。針對不同待測物，該方法的靈敏度為1.7-920.7ng/mL，檢出限為0.4-76.9ng/mL。對海河水進行預(yù)處理，并使用該ELISA方法檢測

3、其中添加的苯脲類除草劑，回收率在77.05-121.71％之間，說明該方法準(zhǔn)確可靠。
　　使用CAMM結(jié)合QSAR方法分析了苯脲類除草劑分子結(jié)構(gòu)、亞結(jié)構(gòu)及其性質(zhì)對抗體識別的影響，發(fā)現(xiàn):(1)該小分子抗原的疏水性對抗體識別有極為重要的影響，且其貢獻與抗體識別效率呈二次相關(guān);(2)抗原分子的最低未占據(jù)分子軌道能量ELUMO對抗體識別有重要影響;(3)通常認為，用于連接載體蛋白的基團較少暴露在免疫反應(yīng)環(huán)境中，故對抗體識別貢獻不大，所以在