糞腸球菌酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的建立.pdf

1、隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和海洋資源的開(kāi)發(fā)利用，海洋環(huán)境問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，日益受到人們的關(guān)注。人類(lèi)生產(chǎn)生活產(chǎn)生的廢物，以及海洋環(huán)境中有機(jī)污染物的不斷增加，導(dǎo)致越來(lái)越多的病原微生物進(jìn)入海洋，分布于海水、生物體以及沉積物當(dāng)中，致使細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)等成為對(duì)海洋生態(tài)系統(tǒng)及人體健康造成危害的重要源頭。高集約化的水產(chǎn)養(yǎng)殖致使大量的病毒、細(xì)菌等致病微生物在水中滋生，海洋環(huán)境逐漸惡化和海水養(yǎng)殖的規(guī)?；l(fā)展導(dǎo)致水產(chǎn)養(yǎng)殖病害的大面積發(fā)生，該問(wèn)題已成為制約世界海水養(yǎng)殖業(yè)

2、繼續(xù)健康發(fā)展的主要因子之一。為了提高沿岸生態(tài)系統(tǒng)的健康指數(shù)，需要有預(yù)測(cè)、監(jiān)測(cè)、檢測(cè)環(huán)境污染對(duì)海洋野生生物、養(yǎng)殖生物和人類(lèi)影響的敏感而準(zhǔn)確的手段。隨著現(xiàn)代生物檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，基因芯片技術(shù)、DNA探針技術(shù)、PCR技術(shù)、抗體檢測(cè)技術(shù)、生物傳感器等，已廣泛應(yīng)用于海洋病原生物的監(jiān)測(cè)、檢測(cè)。在我國(guó)，對(duì)海洋病原微生物的監(jiān)測(cè)、檢測(cè)一直沿用傳統(tǒng)的檢測(cè)手段，缺少系統(tǒng)、快速的檢測(cè)方法，難以開(kāi)展常規(guī)監(jiān)測(cè)，因此建立系統(tǒng)、特異、簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的海洋病原微生物

3、檢測(cè)方法十分必要。
　　 本課題為《海洋環(huán)境中病原微生物的分子快速檢測(cè)與評(píng)價(jià)技術(shù)》，主要研究?jī)?nèi)容是研發(fā)用于海洋環(huán)境(海水及水產(chǎn)品)中病毒、致病菌等病原微生物，重點(diǎn)針對(duì)可能引起人類(lèi)疾病的快速檢測(cè)的分子生物技術(shù)，為研制用于這些微生物的現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)手段和設(shè)備奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。檢測(cè)方法擬采用基因芯片檢測(cè)、蛋白質(zhì)檢測(cè)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)三種。
　　 本論文針對(duì)課題研究?jī)?nèi)容的一部分，研究開(kāi)發(fā)能夠引起人類(lèi)疾病的病原微生物的蛋白

4、質(zhì)水平檢測(cè)技術(shù)，重點(diǎn)是可能引起人類(lèi)疾病的且在海洋環(huán)境污染指示中具有重要價(jià)值的腸球菌酶聯(lián)免疫(ELISA)方法的建立。以1×1010個(gè)/mL的滅活糞腸球菌菌體懸液為抗原自行制備了糞腸球菌的多克隆抗血清，抗血清效價(jià)達(dá)到1：2048000。與其他菌的交叉反應(yīng)效價(jià)均較低，具有很高的靈敏度和特異性。本文建立了以菌體為包被抗原的間接酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，抗血清最適稀釋度為12800倍，最低檢測(cè)限達(dá)到1.5×103CFU/mL左右。同時(shí)用超聲波震蕩提取了