PMB親和介質(zhì)用于生物制品中內(nèi)毒素去除的研究.pdf

1、生物制品大多是由革蘭氏陰性菌表達(dá)制備的，內(nèi)毒素含量通常很高，為保證生物制品使用的安全性，必須加以去除。百日咳疫苗是由百日咳桿菌表達(dá)制備的，原料液中內(nèi)毒素含量極高，經(jīng)過一步離子交換層析雖可去除其中95％以上的內(nèi)毒素，但其殘留的內(nèi)毒素含量仍然很高，必須設(shè)法去除。本文將合成的多粘菌素B(PMB)親和介質(zhì)用于生物制品中內(nèi)毒素的去除，探索了介質(zhì)特性、溶液環(huán)境、蛋白質(zhì)特性和操作條件對內(nèi)毒素去除和蛋白質(zhì)回收的影響規(guī)律，建立了高效的內(nèi)毒素去除工藝。

2、r>　　 首先以瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，PMB為親和配基，合成了PMB QZTFF親和介質(zhì)，考察了環(huán)氧活化試劑、偶聯(lián)反應(yīng)pH值和偶聯(lián)反應(yīng)中PMB的加入量對介質(zhì)合成的影響，建立了間隔臂長度可調(diào)、配基密度可控的PMB親和介質(zhì)合成方法。
　　 在此基礎(chǔ)上，將所制備的介質(zhì)用于去除不同蛋白質(zhì)溶液中的內(nèi)毒素，并重點(diǎn)考察了介質(zhì)特性、溶液環(huán)境、蛋白質(zhì)特性和操作條件對內(nèi)毒素去除和蛋白質(zhì)回收的影響。結(jié)果表明配基密度、pH值、鹽濃度和蛋白質(zhì)特性(等電點(diǎn)和

3、疏水性)對內(nèi)毒素去除效果均有重要影響。pH通過改變各分子的帶電性質(zhì)影響分子間的靜電作用，進(jìn)而影響內(nèi)毒素的去除和蛋白質(zhì)的回收，鹽濃度的改變則會同時影響分子間的靜電作用和疏水作用，而蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和疏水性是影響蛋白質(zhì)回收的主要因素。在優(yōu)化的條件下，血紅蛋白、人血清白蛋白和溶菌酶的回收率分別達(dá)到87.2％、73.4％和97.3％，相應(yīng)的內(nèi)毒素去除率分別達(dá)到99.8％、97.9％和99.7％。
　　 在前述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行百日咳疫苗中