鯊魚皮和豬皮膠原蛋白及其抗氧化活性肽的特性研究.pdf

1、本文以清除DPPH自由基的能力為主要依據(jù)，通過(guò)鯊魚皮和豬皮中膠原蛋白部分特性及其比較，生物酶法制備膠原小分子肽及其初步分離研究，抗氧化肽部分特性研究等五部分內(nèi)容研究了鯊魚皮和豬皮膠原蛋白及其抗氧化活性肽的特性。 1、通過(guò)鯊魚皮和豬皮膠原蛋白的得率、電泳、二級(jí)結(jié)構(gòu)、變性溫度等試驗(yàn)，研究并比較了鯊魚皮和豬皮中膠原蛋白部分特性。結(jié)果表明(1)鯊魚皮和豬皮膠原蛋白羥脯氨酸含量分別為10.32mg/g和15.47mg/g，以鮮重為基數(shù)，得

2、率分別是8.27％和14.36％；(2)兩者膠原蛋白均為I型，分子量均分布在110KD附近和200KD附近；(3)二級(jí)結(jié)構(gòu)顯示鯊魚皮膠原蛋白含有51％的β-折疊和49％的無(wú)規(guī)卷曲，豬皮膠原蛋白含有44.9％的β-折疊和55.1％的無(wú)規(guī)卷曲；(4)DSC結(jié)果顯示鯊魚皮Ts=61.1℃，豬皮Ts=47.8℃，這個(gè)結(jié)果符合鯊魚皮膠原蛋白比豬皮膠原蛋白的β-折疊含量高這一特點(diǎn)；(5)紫外連續(xù)掃描結(jié)果顯示鯊魚皮膠原蛋白紫外掃描波長(zhǎng)為230nm，豬

3、皮為222nm，兩者均在膠原蛋白特征波長(zhǎng)范圍之內(nèi)。 2、通過(guò)生物酶法制備膠原小分子肽及其初步分離實(shí)驗(yàn)，研究確定了酶解豬皮膠原蛋白獲得抗氧化活性肽的最佳酶解組合；并利用DPPH方法測(cè)定豬皮膠原蛋白肽清除自由基能力，以清除DPPH自由基的能力為指標(biāo)，利用超濾、柱層析等方法對(duì)所得的水解液進(jìn)行分離純化，篩選活性最高的組分。結(jié)果顯示：(1)以清除·OH自由基的能力為指標(biāo)測(cè)得胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和菠蘿蛋白酶的最佳酶解時(shí)間分別為5h

4、、5h、5h和4h；(2)胃蛋白酶→木瓜蛋白酶→菠蘿蛋白酶依次酶解得到的酶解液抗氧化活性相對(duì)較高，因此確定為最佳酶解組合；(3)水解液經(jīng)分離純化得到了三種具有較高抗氧化活性的肽。 3、為了進(jìn)一步研究豬皮膠原蛋白肽的生物活性，本試驗(yàn)對(duì)酶解液以及最終得到的具有抗氧化活性的蛋白多肽進(jìn)行了部分理化特性的研究，通過(guò)氨基酸組分分析、抑菌圈測(cè)定、小分子多肽電泳等方法進(jìn)行理化性質(zhì)的研究。結(jié)果顯示：(1)氨基酸組分分析顯示P1’、P2’和P3’組

5、分含具有自由基清除作用的關(guān)鍵氨基酸甲硫氨酸、酪氨酸和組氨酸等；(2)通過(guò)抑菌試驗(yàn)的初步研究可知酶解液具有抑菌活性，但具體是哪一種物質(zhì)以及抑菌機(jī)理需要進(jìn)一步的研究確定；(3)將P1’、P2’和P3’組分進(jìn)行電泳，結(jié)果顯示P1’中的各組分分子量均在20KDa左右，P3’中仍含有三條肽鏈，此三條鏈的分子量分別約為21KDa、12 KDa和6.5 KDa，因?yàn)楸驹囼?yàn)采用的是SDS-PAGE電泳，其中的SDS具有變性劑的作用，所以P3’中的三條鏈