魷魚(yú)皮膠原蛋白原合肽的制備及其抗氧化和抗衰老活性的研究.pdf

1、衰老是生命有機(jī)體的自然規(guī)律，是生物體全身各組織、器官的退行性變化，是諸多生理、病理過(guò)程綜合作用的結(jié)果。抗衰老活性肽是指能夠抗氧化，清除自由基，改善體質(zhì)，增強(qiáng)免疫力，提高生命效率，使生命在遺傳特性決定的限度內(nèi)延長(zhǎng)壽限的肽類物質(zhì)。膠原蛋白是一類重要的結(jié)構(gòu)蛋白，廣泛存在于多細(xì)胞動(dòng)物的骨骼、表皮和肌腱等支持組織中。膠原蛋白中含有豐富的甘氨酸、脯氨酸及羥脯氨酸，其水解產(chǎn)物中還存在有生理活性肽，被廣泛地應(yīng)用在在醫(yī)療、保健及美容等方面。本文以采用胃蛋

2、白酶促溶(5℃，72h)的方法從魷魚(yú)皮中提取純化的膠原蛋白為研究對(duì)象，共分為四章分別對(duì)膠原蛋白活性肽的制備方法、抗氧化和抗衰老功效評(píng)價(jià)、分級(jí)純化與理化特性、功能特性以及應(yīng)用前景進(jìn)行了研究和探討。所取得的研究成果主要體現(xiàn)在以下方面：
　　 1.分別采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶對(duì)膠原蛋白進(jìn)行酶解，以抗氧化活性為指標(biāo)篩選出制備膠原蛋白復(fù)合肽的最佳工藝條件，并在相應(yīng)條件下制備出三種活性肽，經(jīng)4℃條件下透析72h，即膠原蛋白復(fù)合肽Ⅰ

3、(胰蛋白酶，50℃，pH8.0，20mins)、復(fù)合肽Ⅱ(胃蛋白酶，37℃，pH2.0，40mins)和復(fù)合肽Ⅲ(木瓜蛋白酶，55℃，pH7.0，40mins)。
　　 2.采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑢?duì)三種膠原蛋白復(fù)合肽的抗氧化和抗衰老功效進(jìn)行了評(píng)價(jià)。經(jīng)果蠅壽命實(shí)驗(yàn)表明，魚(yú)皮膠原活性肽能顯著延長(zhǎng)果蠅的壽命，果蠅的最高壽命由對(duì)照組的60天提高到實(shí)驗(yàn)組的84天，其延壽功效達(dá)到同濃度維生素E的94％。其延壽的機(jī)理同其抗氧化活性有關(guān)，經(jīng)魚(yú)皮膠原

4、活性肽飼養(yǎng)的果蠅，其脂褐質(zhì)含量明顯低于對(duì)照組，功效達(dá)到相同劑量維生素E的89％。同時(shí)，體外實(shí)驗(yàn)也顯示，三種目標(biāo)肽具有很強(qiáng)的抗氧化作用，當(dāng)其濃度為2和5 mg/ml時(shí)，對(duì)多酚氧化酶的抑制率可達(dá)同濃度維生素C的65％和100％；對(duì)超氧陰離子和DPPH自由基也有一定的抑制作用，其抑制率為35％和60％。
　　 3.采用葡聚糖凝膠層析法(Sephadex G-50，68×1.5cm)，對(duì)透析后的3種復(fù)合肽進(jìn)行分級(jí)純化，篩選出具有較高抑制

5、活力的三種活性肽，分別是y2，w1和m4.用SDS-PAGE凝膠電泳方法得到了三種圖譜清晰的單一條帶.測(cè)得w1的分子量為12056.5D；m4的分子量為9078.6D；y2的分子量為7376.9D。最后測(cè)定了三種活性肽的氨基酸組成。
　　 4.對(duì)三種復(fù)合肽的功能特性進(jìn)行了比較，在溶解性方面，膠原蛋白為39.2％，而復(fù)合肽都在98％以上，復(fù)合肽優(yōu)于膠原蛋白，在吸水性、濕潤(rùn)性和吸油性，復(fù)合肽也皆強(qiáng)于膠原蛋白；而在保水性、乳化性、起泡