樟芝發(fā)酵及其代謝產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、樟芝(Antrodia Cinnamomea),又名牛樟芝、牛樟菇。樟芝發(fā)酵產(chǎn)品中含有多種生理活性物質(zhì),具有保護肝臟、抗炎、抗氧化、解毒、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等功效。三萜系化合物是樟芝中的主要活性成分,三萜類化合物種類繁多。本論文以總?cè)苹衔餅橹饕繕水a(chǎn)物,對樟芝液態(tài)和固態(tài)發(fā)酵條件進行了優(yōu)化,并對這兩種生產(chǎn)方式代謝產(chǎn)物進行了比較。
　　 在前人的基礎上改進了檢測樟芝三萜類化合物含量的香草醛-高氯酸比色法。確定了最佳提取條件為:1.

2、0g發(fā)酵樣品,加入95％乙醇溶液50mL,50℃恒溫水浴鍋中浸泡1.5h;最佳檢測條件為:取0.1mL過濾液,加入0.2mL新配的5％香草醛.冰醋酸溶液和0.5mL的高氯酸,放入60℃恒溫水浴中加熱20min后,用流動冷卻水冷卻至室溫,加入5.OmL冰醋酸,混勻,于波長550nm處檢測OD值。與其他檢測方法相比,此顯色反應靈敏度較高,重現(xiàn)性和穩(wěn)定性也較好。
　　 以樟芝菌體量和樟芝三萜系化合物為目標產(chǎn)物,首先通過單因素實驗優(yōu)化了

3、樟芝搖瓶培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。優(yōu)化后的樟芝液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基為:葡萄糖60g/L,大豆水解液40mL/L,玉米漿含量20mL/L,硫酸鎂和磷酸氫二鈉各0.50g/L。培養(yǎng)條件為:裝料量120mL/500mL瓶,接種量為裝料量的12.5％(v/v),培養(yǎng)溫度28℃,搖床轉(zhuǎn)速120r/min,pH5.5。
　　 在上述實驗的基礎上,對樟芝液態(tài)發(fā)酵菌體量和三萜類化合物含量影響較為顯著的因素進行均勻設計和響應面分析的優(yōu)化實驗。得到最優(yōu)液態(tài)發(fā)酵條

4、件為:葡萄糖43.6g/L,大豆水解液75.7mL/L,玉米漿用量40mL/L,硫酸鎂和磷酸氫二鈉各0.50g/L。培養(yǎng)條件為:裝料量120mL/500mL,接種量為裝料量的12.5％(v/v),培養(yǎng)溫度28℃,搖床轉(zhuǎn)速120r/min,初始pH值4.75。搖瓶培養(yǎng)7天后的樟芝菌體量和三萜化合物含量分別為12.05g/L和45.04mg/g,是優(yōu)化前0.73g/L菌體量和20.9mg/g三萜類化合物含量的16.5倍和2.16倍,也是文獻

5、報道的樟芝液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中三萜類化合物含量的2.7倍。
　　 以樟芝三萜系化合物作為目標產(chǎn)物,首先通過單因素實驗對樟芝固態(tài)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化。優(yōu)化后的樟芝固態(tài)發(fā)酵條件為(每瓶):小米105g,添加0.3g NH4Cl,加水量78mL,接種量45mL,培養(yǎng)溫度28℃。
　　 在上述實驗的基礎上,對樟芝三萜類化合物含量影響較為顯著的因素進行了均勻設計和響應面分析優(yōu)化實驗。得到最優(yōu)固態(tài)發(fā)酵條件為(每瓶):小米120g,加

6、水量48mL,接種量55mL,NH4Cl加量0.22g,培養(yǎng)溫度28℃。在此培養(yǎng)條件下,樟芝三萜系化合物含量達到82.44mg/g(干基),是未優(yōu)化前的1.56倍;固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中三萜系化合物的含量是文獻報道的樟芝液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中三萜類化合物含量的5倍,也是本實驗樟芝液態(tài)三萜化合物含量的1.83倍。
　　 比較了樟芝液態(tài)和固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物活性物質(zhì)成分及含量,可以看出樟芝固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的總?cè)苹衔锖繛?4.44mg/g,是液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中