六種食品致病菌的多重PCR檢測.pdf

1、本文針對在我國食物中毒中最常見的致病菌進(jìn)行研究，尋求食物中毒診斷及食品檢測的有效方法。所涉及的食源性致病菌有腸毒性大腸埃希菌(E.coli-ETEC)、蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)、沙門氏菌(Salmonellaspp)、大腸埃希菌O157：H7(E.coli-O157：H7)、志賀氏菌(Shigellaspp)、霍亂弧菌(Vibriocholerae)等菌屬或菌。通過大量的文獻(xiàn)參考和實驗，經(jīng)過篩選挑取種或?qū)匍g特異的序列

2、及相應(yīng)引物，然后用這些引物對各種細(xì)菌的基因組序列進(jìn)行PCR擴增檢測其特異性，最終決定出用于檢測的最優(yōu)的目的基因及引物。其中沙門菌和志賀菌的引物為屬間通用引物，其余各菌的引物均檢測到種的水平。各菌的目的基因分別為熱不穩(wěn)定腸毒素A亞基基因eltA(腸毒性大腸埃希菌)、溶血素hlyA基因(大腸埃希菌O157：H7)、侵襲質(zhì)粒抗原pINVF6_M1382IpaH1.4(ipaH1.4)基因(志賀氏菌)、侵襲力蛋白A(invA)基因(沙門氏菌)、

3、腸毒素蛋白A和B基因(霍亂弧菌)、溶血素基因(蠟樣芽孢桿菌)。這些目的基因的引物在一個混合的PCR體系中擴增出各自的目的基因，并且特異性和敏感度都和單獨PCR擴增相同(靈敏度最低均為10.30fg)。多重體系擴增所用時間也和單獨PCR相同，從樣品處理開始僅需3-4個小時即可得到結(jié)果。用調(diào)整好的多重體系對隨機組合的致病菌樣品進(jìn)行擴增，以驗證擴增時在較高敏感度的條件下各目的基因及引物間沒有干擾。最后將多重體系付諸實踐，檢測了21種食品樣品，