Rybp基因?qū)η卮ㄅ３杉〖?xì)胞分化作用的研究.pdf

1、隨著人們生活水平不斷提高，牛肉作為一種高蛋白低膽固醇的健康食品越來(lái)越受到人們的青睞，市場(chǎng)牛肉的需求量越來(lái)越大，供給不足，牛肉價(jià)格持續(xù)上漲。如何提高牛肉產(chǎn)量和改善牛肉品質(zhì)成為廣大育種工作者關(guān)注的熱點(diǎn)，而對(duì)肉牛肌肉組織生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控機(jī)制的研究將從分子水平揭示影響肉牛產(chǎn)肉性能和牛肉品質(zhì)形成的機(jī)理，為肉牛的分子育種工作奠定基礎(chǔ)。Ring和YY1結(jié)合蛋白(Ring and YY1binding protein，Rybp)已在小鼠上被證實(shí)對(duì)肌生成具有

2、抑制作用，而在牛上還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，仍需要進(jìn)一步研究。本研究以Rybp基因?yàn)槟繕?biāo)基因，利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，檢測(cè)了該基因在秦川牛16種組織、5個(gè)不同發(fā)育階段肌肉、脂肪組織以及不同分化階段牛成肌細(xì)胞中表達(dá)水平，利用腺病毒介導(dǎo)該基因在成肌細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)，探究Rybp基因?qū)ε３杉〖?xì)胞分化的作用，通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，篩選和鑒定過(guò)量表達(dá)Rybp基因后的差異表達(dá)基因，初步揭示了Rybp基因在牛成肌細(xì)胞分化過(guò)程中的功能及其對(duì)一些重要的成肌細(xì)胞分化相關(guān)基因

3、的影響。獲得的主要研究結(jié)果如下:
　　1.秦川牛Rybp基因表達(dá)特性分析結(jié)果表明，Rybp基因在成年秦川牛睪丸組織中表達(dá)量最高，而在背最長(zhǎng)肌、里脊、心臟等組織中的表達(dá)量相對(duì)較低;隨著秦川牛年齡的增加，Rybp基因在肌肉組織中的表達(dá)水平逐漸升高，在脂肪組織中的表達(dá)水平顯著下降;在不同分化階段成肌細(xì)胞中，隨著成肌細(xì)胞分化進(jìn)程的推進(jìn)，Rybp基因表達(dá)水平逐漸升高，而當(dāng)分化減速后，Rybp基因表達(dá)水平逐漸降低。
　　2.克隆得到秦川

4、牛Rybp基因的CDS區(qū)序列，其長(zhǎng)度為687bp，編碼229個(gè)氨基酸殘基，然后成功構(gòu)建并獲得了高滴度牛Rybp基因腺病毒過(guò)表達(dá)載體，病毒滴度為1×109pfu/mL。
　　3.在牛成肌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Rybp基因，可顯著抑制肌管的形成，這種差異從過(guò)表達(dá)后2d開(kāi)始出現(xiàn)，到6d達(dá)到最顯著。將過(guò)表達(dá)Rybp基因6d后的成肌細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，結(jié)果共篩選出1311個(gè)差異表達(dá)基因，其中有707個(gè)基因表達(dá)水平上調(diào)，604個(gè)基因表達(dá)水平