美味牛肝菌多糖高產(chǎn)菌株的選育及其發(fā)酵工藝研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、美味牛肝菌屬外生菌根菌,其多糖具有明顯的抗腫瘤效果。為了選育出美味牛肝菌多糖高產(chǎn)菌株,本實驗首次采用原生質(zhì)體紫外線一氯化鋰(UV-LiCl)復(fù)合誘變方法,并對誘變株(UL-7)發(fā)酵工藝進行了研究。本實驗主要研究結(jié)果如下: 1、首先摸索出美味牛肝菌出發(fā)菌株ACCC50559快速生長的斜面培養(yǎng)基,并優(yōu)化出美味牛肝菌多糖的提取工藝和含量測定方法。在此基礎(chǔ)之上,進行了出發(fā)菌株ACCC50559原生質(zhì)體UV-LiCl復(fù)合誘變選育多糖高產(chǎn)菌

2、株的研究,確定了原生質(zhì)體制備和復(fù)合誘變的最佳條件。原生質(zhì)體制備最佳條件為:培養(yǎng)52h的菌絲用0.02g/mL纖維素酶和0.02g/mL蝸牛酶(體積比1:1)混合酶液酶解,以0.6mol/L的甘露醇作為穩(wěn)滲劑,在25~29℃下酶解2h,原生質(zhì)體的數(shù)目可達3.50×106個/mL,其再生率為7.14%;原生質(zhì)體UV-LiCl復(fù)合誘變的最佳條件為:距15W紫外燈30cm處,照射原生質(zhì)體6min,然后涂布在0.04%LiCl平板上,避光培養(yǎng)10

3、d,致死率達到79.6%。對誘變菌株進行平板培養(yǎng)和發(fā)酵試驗,通過初篩和復(fù)篩最終選育出遺傳性狀穩(wěn)定的多糖高產(chǎn)菌株(UL-7),其菌落密度和菌絲生長長勢較出發(fā)菌株要密和粗壯,生長速度快,產(chǎn)量為3.972g.L-1,較出發(fā)菌株提高了41.9%; 2、優(yōu)化出誘變株UL-7液體發(fā)酵的最佳工藝條件。液體發(fā)酵產(chǎn)多糖的最適培養(yǎng)基配方(%):蔗糖2,蛋白胨0.6,ZnSO4·7H2O0.10,CaCO30.1,MgSO4·7H2O0.2,KH2P

4、O40.3,馬鈴薯10;液體發(fā)酵產(chǎn)多糖的最適發(fā)酵條件:初始pH5.0~5.4,振蕩速度120r/mm,培養(yǎng)溫度25℃~28℃,裝液系數(shù)40%(v/v),加玻璃珠10顆,發(fā)酵時間5d,多糖產(chǎn)量可達到4.361g/L; 3、在誘變株UL-7最佳液體發(fā)酵條件基礎(chǔ)上,首次探索出其高密度發(fā)酵高產(chǎn)多糖的工藝:接種生物量40g/L,初始pH5.4,培養(yǎng)溫度25℃,裝液系數(shù)40%(v/v),振蕩速度160r/min,蛋白胨增加到1.8%,碳氮比

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