神經(jīng)生長因子對大鼠腦缺血再灌注后Fas-L蛋白和p-PKB表達的影響.pdf

1、目的：采用SD大鼠腦缺血再灌注模型，觀察不同時間點大鼠神經(jīng)功能缺損情況及p-PKB(磷酸化蛋白激酶B)和Fas-L(Fas ligand，F(xiàn)as配基)的表達情況，并探討NGF(神經(jīng)生長因子)對它的影響，為臨床應用NGF(神經(jīng)生長因子)治療缺血性腦血管病提供依據(jù)。 方法：健康成年SD大鼠55只(大連醫(yī)科大學實驗動物中心)，雌雄不限，體重200-250g，清潔級，飼養(yǎng)環(huán)境溫度21℃，自由進食水；隨機分為假手術(shù)組(n=5)(第一組)；

2、缺血再灌注組(n=30)，按缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h再分為6組(分別為2、3、4、5、6、7組)，每組5只 NGF組(第8f組和8p組，8f組是缺血2h再灌注6h注射NGF，8p組為缺血2h再灌注72h注射NGF)和生理鹽水對照組(第9f組和9p組)(各5只，分別為再灌注6h注射生理鹽水和再灌注72h注射生理鹽水)。參照Nagasawa報告的方法，用10％的水合氯醛(0.35ml/100g腹腔注射)麻醉動

3、物，取仰臥位固定在手術(shù)臺上，行右側(cè)MCAO手術(shù)，取頸部正中切口，分離出頸總、頸外和頸內(nèi)動脈，結(jié)扎頸外動脈起始處、頸總動脈近心端，在頸總動脈分叉處剪一個小口，把頭端蘸有石蠟的直徑0.20mm的高彈力魚線向頸內(nèi)動脈端插入，繼續(xù)向前推進，直到感到稍有阻力，約為18mm，提示已到大腦中動脈的起始部，2h后緩慢拔出魚線進行再灌注。動物蘇醒后觀查其行為和體態(tài)，判斷MCAO模型是否成功。假手術(shù)組插入尼龍線后馬上拔出，余步驟同手術(shù)組。缺血再灌注模型動物

4、清醒后，前肢屈曲內(nèi)收者為研究對象，8f組是缺血2h再灌注6h注射NGF，8p組為缺血2h再灌注72h注射NGF，方法是：于再灌注5分鐘后注射NGF(每100g體重500BU/0.1ml)，9f組和9p組分別為再灌注6h和再灌注72h以同樣的方法注射相同體積的生理鹽水。分別觀察幾組動物的Zea Long5分制評分和大鼠腦內(nèi)p-PKB蛋白和Fas-L基因蛋白的表達。 結(jié)果：神經(jīng)功能評分：2-9組分別為：2.000±0.6032，2.

5、200±0.4112，2.400±0.6880，2.600±0.3348，2.800±0.4621，3.000±0.5864.1.400±0.6253(8f)，2.300±0.3650(8p)，2.200±0.6903(9f)，3.100±0.0038(9p)，其中NGF組與鹽水組比較：分別比較8f組和9f組、8p組和9p組，神經(jīng)功能障礙均明顯減輕(p<0.05)。腦缺血再灌注后，大鼠腦內(nèi)Fas-L6h達高峰，后減少。與缺血再灌注組相比