三角酵母D-氨基酸氧化酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的轉(zhuǎn)化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、三角酵母D-氨基酸氧化酶(D-aminoacidoxidase，DAAO，EC1.4.3.3)是一種大小為38kDa的黃素蛋白，它專一性催化D-氨基酸。DAAO在利用兩步酶法生產(chǎn)7-氨基頭孢烷酸(7-ACA)的過程中起重要作用。此外，DAAO也可被用于生產(chǎn)α-酮酸和純化L-氨基酸。為了滿足工業(yè)生產(chǎn)對DAAO的大量需求，對DAAO進行重組表達是一條很有前景的途徑。 為了開辟一條高效表達DAAO的新途徑，本研究在畢赤酵母(Pichi

2、apastoris)中克隆三角酵母(Trigonopsisvariabilis)DAAO基因。首先，利用PCR克隆方法，從三角酵母中成功克隆得到DAAO基因，大小為1071bp。之后，將DAAO基因與測序載體pBS-T連接，成功構(gòu)建了測序質(zhì)粒pBS-T/DAAO。將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌TOP10中并測序。運用軟件對測序結(jié)果進行分析，證明與GenBank中DAAO基因的序列相同。 之后通過BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切作用，將DAAO的編

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