酸性植酸酶基因的克隆及其在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達.pdf

1、植酸酶是一種新型的可作為動物飼料添加劑的重要酶制劑,是一種能水解植酸的磷酸酶類.在動物飼料中富含磷的谷物、豆類和油料等作物中,磷的基本貯存形式是植酸磷,因單胃動物體內(nèi)缺少能分解植酸的酶很難利用這些植酸中的磷,其利用率極低.植酸酶對提高飼料中磷的利用率以及減輕因動物高磷糞便所導(dǎo)致的環(huán)境污染有很大的作用.植酸酶主要來自于植物和微生物,來源于植物的植酸酶均屬于6-植酸酶,最適pH范圍在5.0-7.5,不適合在單胃動物中起作用的,而且在植物中含

2、量極低,因此植酸酶的研究方向轉(zhuǎn)向最適pH值為酸性、酶含量較高的絲狀真菌.該實驗成功從絲狀真菌中提取出總DNA,通過PCR擴增,將此酸性植酸酶全基因通過pPIC9K vector轉(zhuǎn)化酵母細胞,提取酵母轉(zhuǎn)化子基因組進行PCR驗證,結(jié)果表明外源基因整合到了酵母的染色體上.提取未降解的、不含DNA與其他雜質(zhì)的RNA是進行分子克隆和基因表達分析等研究的基礎(chǔ).由于復(fù)雜的細胞壁和內(nèi)源酶活性的存在,所以要從絲狀真菌中提取和純化出有生物活性的RNA比較困

3、難.為獲得高質(zhì)量的RNA,該實驗比較了TRIZOL提總RNA、異硫氰酸胍法提取菌株總RNA、熱硼酸法提取菌株總RNA三種不同的提取方法,得出熱硼酸法適合于富含Rnase和多糖的絲狀真菌的RNA的提取,該方法可得到完整、均一的RNA樣品,并且得到的RNA可用于RT-PCR等分子生物學(xué)實驗操作.該實驗以絲狀真菌黑曲霉的總cDNA為模板,通過PCR方法擴增到理想大小的DNA片段,分別將其與質(zhì)粒pBV220連接,將正確構(gòu)建的重組質(zhì)粒pBV220