二十碳五烯酸協(xié)同長春瑞濱對A-549細(xì)胞作用研究.pdf

1、目的：探討二十碳五烯酸(EPA,Eicosapentaenoic Acid)以及聯(lián)合長春瑞濱(NVB，Vinore lb ine)對人肺癌A-549細(xì)胞株的增值和凋亡以及細(xì)胞周期的影響。
　　方法：在體外培養(yǎng)肺癌A-549細(xì)胞株。實驗一，分為對照組和實驗組。對照組只加培養(yǎng)液，實驗組用 EPA60μg/mL的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，采用了倒置顯微鏡、HE染色、AnnexinV-PI雙染色熒光方法，在顯微鏡下觀察人肺癌A-549腫瘤細(xì)胞的形態(tài)

2、變化。實驗二,分為EPA組、NVB組、EPA+NVB組。EPA組在l5、30、45、60、75、90μg/mL，6個濃度下采用MTT比色法,測定第24、48、72小時的IC50值。NVB組在12、16、20、24、28、32μg/mL6個濃度下采用MTT比色法,測定第24、48、72小時的IC50值。EPA+NVB組采用了序貫用藥方法，EPA和NVB的實驗濃度均為各24h時IC50以下藥物濃度，測定了聯(lián)合用藥后NVB IC50的變化及用

3、等效線圖解法觀察兩種藥物對人肺癌A-549細(xì)胞株后的相互作用。實驗三，分為六個組，分別為對照組、EPA15、30、60組、NVB組、EPA+NVB組，采用流式細(xì)胞儀檢測各組對人肺癌A-549細(xì)胞株的胞凋亡情況以及細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果：①用倒置顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)實驗組的A-549腫瘤細(xì)胞體積縮小、細(xì)胞呈圓形，染色質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)聚集，細(xì)胞膜分割細(xì)胞形成凋亡小體，細(xì)胞之間連接松散，貼壁能力減弱。②HE染色：在倒置顯微鏡下，用EPA處理組

4、的肺癌A-549細(xì)胞可見體積縮小，呈圓形，可見有的細(xì)胞染色質(zhì)脫落，有的細(xì)胞膜分割細(xì)胞形成凋亡小體，也可見核染色質(zhì)濃縮及染色質(zhì)塊形成。③AnnexinV-PI雙染色肺癌A-549腫瘤細(xì)胞，在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，實驗組A-549腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜被染成綠色，細(xì)胞核染色質(zhì)呈紅色，并且細(xì)胞周圍可見帶綠色熒光的凋亡小體。④MTT實驗結(jié)果表明：EPA在15μg/mL～90μg/mL范圍內(nèi)，于24、48、72小時對肺癌A-549細(xì)胞株均有抑制生長作用且

5、與N VB有協(xié)同抗癌作用，并表現(xiàn)出濃度、時間依賴性關(guān)系。⑤流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)EPA聯(lián)合NVB組的凋亡率較單用NVB組明顯增加。⑥EPA終濃度在15μg/mL、30μg/mL、45μg/mL處理48 h后，G0/G1期細(xì)胞百分比下降，S期細(xì)胞百分比上升，阻滯周期于S期。NVB濃度在15μg/mL處理48h后，G0/G1期細(xì)胞百分比下降，G2/M期細(xì)胞百分比上升，阻滯周期于G2/M期。聯(lián)合應(yīng)用EPA和NVB濃度在15μg/mL處理48h

6、后，G0/G1期細(xì)胞百分比下降，S期和G2/M期細(xì)胞百分比上升，阻滯周期于S期和G2/M期。
　　結(jié)論：
　　1.經(jīng)凋亡形態(tài)學(xué)分析，在體外實驗中，EPA對人肺癌A-549細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡作用。
　　2.體外實驗中，EPA對人肺癌A-549細(xì)胞生長有抑制作用，呈明顯的時間和劑量依賴性。
　　3. EPA與NVB對人肺癌A-549細(xì)胞的抑制具有協(xié)同作用，與單用NVB相比，聯(lián)合應(yīng)用可減少N VB的用藥劑量。
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