乳腺癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、1．乳腺癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群初步研究。 目的:檢測不同乳腺癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群含量，并探討使乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群富集的方法。 方法:利用流式細(xì)胞儀檢測三種乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s中SP細(xì)胞(side population cell)比例及CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞比例。用Percoll不連續(xù)密度梯度法分離MCF-7細(xì)胞亞群

2、，通過流式細(xì)胞儀篩選出SP細(xì)胞富集的亞群；用添加生長因子的無血清培養(yǎng)液來培養(yǎng)MCF-7，不同時(shí)間點(diǎn)檢測CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞比例。 結(jié)果: MCF-7、MDA-MB-435s中SP細(xì)胞比例分別為3.61％和2.72％，MDA-MB-231中未檢測到SP細(xì)胞。三種乳腺癌細(xì)胞系中CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞比例分別為0.87％、0.59％和94.04％。MCF-7經(jīng)Percoll分選得到五個(gè)亞群

3、，各亞群在SP細(xì)胞含量、細(xì)胞周期、生長曲線及克隆形成率等方面均存在異質(zhì)性，D亞群SP細(xì)胞富集，比例高達(dá)25.23％；MCF-7在無血清培養(yǎng)液中，腫瘤干細(xì)胞呈懸浮的干細(xì)胞球樣生長，CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞比例隨著無血清培養(yǎng)時(shí)間的增加而增加，三周時(shí)達(dá)29.35％。 結(jié)論: SP檢測與CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞檢測是目前乳腺癌干細(xì)胞檢測的兩種常用方法，但兩者用于同一種乳腺癌細(xì)胞系中的檢測結(jié)果并不一

4、致，均有一定的局限性。乳腺癌細(xì)胞系MCF-7具有異質(zhì)性特征，通過Percoll分選或無血清培養(yǎng)均能使MCF-7中腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群(SP細(xì)胞或CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞)富集。 目的:探討雌二醇(E<,2>)及拮抗劑三苯氧胺(TAM)對ER陽性乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群(CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞)的影響。 方法: E<,2>組設(shè)10<'-7>、10<'-8>及10<

5、'-9>mol/L三個(gè)濃度，E<,2>+TAM組再加入10<'-6>mol/L TAM，對照組加等量藥物溶劑(乙醇)，培養(yǎng)10天和20天時(shí)分別用流式細(xì)胞儀檢測各組中CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞比例。 結(jié)果:培養(yǎng)10天時(shí)，三個(gè)不同濃度E2組中CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞比例分別為(2.28±0.38)％、(6.35±0.5 7)％和(2.86±0.29)％，與對照組中(0.83±0.03)％相比比例

6、均增高(P<0.05)。E2+TAM組中CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞比例分別為(1.85±0.19)％、(4.11±0.41)％和(1.73±0.33)％，與相同濃度E<,2>組中相比比例均下降(P<0.05)。培養(yǎng)20天時(shí)，E<,2>組中CD44<'+>CD24<'-/low>細(xì)胞比例分別為(2.41±0.25)％、(6.18±0.41)％和(2.47±0.15)％，E<,2>+TAM組中比例分別為(1.93±0.21