結(jié)腸癌高轉(zhuǎn)移模型的篩選及細(xì)胞系的建立.pdf

1、選用人結(jié)腸癌細(xì)胞株，模擬臨床腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)，成功建立了裸小鼠人結(jié)腸癌術(shù)后轉(zhuǎn)移模型。選用小鼠結(jié)腸癌，通過體內(nèi)篩選的方法成功建立了一個(gè)轉(zhuǎn)移率高、轉(zhuǎn)移穩(wěn)定、直觀性好、操作簡(jiǎn)便的小鼠結(jié)腸癌高轉(zhuǎn)移模型并建立了相應(yīng)的高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系，并對(duì)它的一般生物學(xué)特性進(jìn)行探討和研究，為結(jié)腸癌基礎(chǔ)與臨床研究及腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供適宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。結(jié)果如下： 1)建立裸小鼠人結(jié)腸癌術(shù)后轉(zhuǎn)移模型。人結(jié)腸腺癌細(xì)胞株HCT-116接種于裸小鼠右側(cè)背部近腋部皮下，獲

2、得皮下移植瘤源，然后采用組織塊法建立28只裸小鼠皮下移植瘤模型。4周后隨機(jī)挑選15只裸小鼠作為實(shí)驗(yàn)組切除腫瘤組織，其余13只裸小鼠作為對(duì)照組，觀察動(dòng)物生存情況及腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況。對(duì)照組裸小鼠9周時(shí)出現(xiàn)惡病質(zhì)，解剖檢查肺轉(zhuǎn)移率為23﹪(3/13)；實(shí)驗(yàn)組裸小鼠術(shù)部無腫瘤復(fù)發(fā)，17周后肺轉(zhuǎn)移率達(dá)到100﹪(15/15)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率100﹪(15/15)，脾臟轉(zhuǎn)移率33.3﹪(5/15)。本模型模擬了臨床腫瘤根除術(shù)后發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的過程，為研

3、究結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制和術(shù)后抗轉(zhuǎn)移治療提供了理想的動(dòng)物模型。 2)采用體內(nèi)篩選的方法建立小鼠結(jié)腸癌高轉(zhuǎn)移模型。將C26小鼠結(jié)腸癌移植于T、B、NK免疫細(xì)胞缺陷的NOD-SCID小鼠皮下，通過皮下移植→肺轉(zhuǎn)移→皮下移植的體內(nèi)篩選方法建立高轉(zhuǎn)移模型。再以相同的方法在BALB/c小鼠體內(nèi)繼續(xù)篩選，同時(shí)進(jìn)行腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移情況觀察、病理組織學(xué)、超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞增值周期和異倍體的觀察。NOD-SCID小鼠篩選5代后肺轉(zhuǎn)移達(dá)100﹪。但篩選后的腫瘤

4、組織皮下移植到BALB/c小鼠體內(nèi)時(shí)，腫瘤的轉(zhuǎn)移程度有所下降，又經(jīng)BALB/c小鼠體內(nèi)4代篩選，腫瘤的移植成瘤率、肺轉(zhuǎn)移率均為100﹪。病理組織學(xué)、超微結(jié)構(gòu)觀察、細(xì)胞增值周期和異倍體等結(jié)果表明與原結(jié)腸癌生物學(xué)特性相似。本研究建立了一個(gè)肺轉(zhuǎn)移率100﹪、轉(zhuǎn)移特性穩(wěn)定、直觀性好、操作簡(jiǎn)便的小鼠結(jié)腸癌高移植模型，為系統(tǒng)性研究結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制和臨床結(jié)腸癌治療提供了好的動(dòng)物模型。 3)利用篩選成功的小鼠結(jié)腸癌高轉(zhuǎn)移腫瘤組織在體外建立一個(gè)具有

5、高轉(zhuǎn)移潛能的小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系，并對(duì)其一般生物學(xué)特性進(jìn)行觀察。采用組織塊法對(duì)小鼠結(jié)腸癌高轉(zhuǎn)移腫瘤組織進(jìn)行原代培養(yǎng)及建系，觀察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、生長(zhǎng)速度、體外侵襲能力、染色體核型、細(xì)胞周期變化、皮下移植的成瘤率和轉(zhuǎn)移情況。初步建立了一個(gè)具有高轉(zhuǎn)移潛能的人結(jié)腸癌細(xì)胞系，目前已傳至18代。細(xì)胞為典型的上皮樣細(xì)胞，倍增時(shí)間為31.8h，未篩選細(xì)胞倍增時(shí)間為32.5h。C26篩選與未篩選細(xì)胞的36h體外過膜數(shù)分別為(60.38±8.86)/高倍視野