花生紅衣原花青素化學(xué)成分、衍生物和生物活性研究.pdf

1、花生(Arachis hypogaeaL.，F(xiàn)abaceae)的種皮（中藥名為紅衣）含有大量的A型原花青素，該類成分由一個碳鍵C4→C8或C4→C6和一個C2→O→C7氧醚鍵連接而成，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分離純化和結(jié)構(gòu)測定較困難，其單體成分研究還不透徹，有必要深入研究紅衣中原花青素的化學(xué)成分和生物活性，為紅衣的藥用價(jià)值提供佐證，同時為紅衣變廢為寶的開發(fā)利用提供理論支持。本文從紅衣中的原花青素類化學(xué)成分研究入手，得到了A型原花青素類寡聚體單體和多聚

2、體，并應(yīng)用光譜法、化學(xué)降解法和超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，同時對紅衣中的原花青素做了生物活性研究，考察其抗氧化活性和抑制α-葡萄糖苷酶活性包括對小腸二糖酶的抑制活性，制備了原花青素衍生物，測定了花生紅衣中化學(xué)成分的含量，并考察不同烹飪方法對成分和抗氧化活性的影響。本實(shí)驗(yàn)研究內(nèi)容涵蓋了天然產(chǎn)物的提取分離、衍生物制備、定量分析和活性檢測多個方面，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.對紅衣的有效成分進(jìn)行較全面的分離鑒定，得到1個酚酸成分-

3、原兒茶酸(1)，10個聚合度不同的A型原花青素低聚體單體，包括2個單倍體，兒茶素(2)和表兒茶素(3)，4個二聚體，原花青素A1(4)、原花青素A2(5)、表兒茶素-(2β→O→7，4β→8)-對映-表兒茶素(6)、表兒茶素-(2β→O→7，4β→6)-兒茶素(7)及3個三聚體，肉桂鞣質(zhì)D-1(8)、表兒茶素-（2β→O→7，4β→8）-[兒茶素-(6→4β)]-表兒茶素(9)、表兒茶素-（4β→8）-表兒茶素-（2β→O→7，4β→8

4、）-兒茶素(10)和1個四聚體、表兒茶素-（2β→O→7，4β→8）-表兒茶素-（4β→6）-表兒茶素-（2β→O→7，4β→8）-兒茶素(11)。化合物結(jié)構(gòu)采用化學(xué)方法和光譜方法確定。化合物10為首次從花生紅衣中分離得到，9為新的A型原花青素三聚體，具有新的連接方式，11為新的A型原花青素四聚體。
　　2.首次采用葡聚糖凝膠色譜法對紅衣中原花青素進(jìn)行分級純化，超高效液相色譜分析結(jié)果表明Sephadex LH-20能按照聚合度有效

5、分離寡聚體。并通過LC-MS對原花青素的質(zhì)譜裂解規(guī)律做了總結(jié)，發(fā)現(xiàn)其主要通過RDA裂解和黃烷單元間的共價(jià)鍵斷裂。
　　3.采用溫和的反應(yīng)試劑半胱氨酸(L-cysteine)進(jìn)行化合物的降解反應(yīng)也是本實(shí)驗(yàn)的一個創(chuàng)新點(diǎn)。半胱氨酸與傳統(tǒng)的降解反應(yīng)試劑芐硫醇相比，毒性低、刺激氣味小。通過LC-MS分析檢測半胱氨酸降解反應(yīng)溶液，可以得知原花青素聚合體的結(jié)構(gòu)單元和連接方式。從多聚物的半胱氨酸降解物中純化出一個新化合物原花青素A2-半胱氨酸(1

6、4)。
　　4.首次對花生紅衣中原花青素多聚體的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，分別以乙醇和甲醇作為Sephadex LH-20洗脫劑制備多聚體E8和M，以半胱氨酸降解反應(yīng)結(jié)合UPLC-MS分析的方法，研究兩者化學(xué)結(jié)構(gòu)。發(fā)現(xiàn)兩種多聚體的延伸單元均主要由表兒茶素和原花青素A2構(gòu)成;末端單元均主要為原花青素A1。M比E8的分子量更大且含有更多的原花青素A2作為延伸單元。
　　5.所有的原花青素單體、多聚體流份和單體衍生物均具有強(qiáng)抗氧化活性，

7、有些化合物還顯示了較強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制活性。制備得到的A型原花青素丙酮縮合物16，為新化合物，具有較強(qiáng)的清除自由基活性并顯著抑制α-葡萄糖苷酶活性。丙酮縮合物親脂性增加，有望更好地穿透生物膜發(fā)揮體內(nèi)活性，因此如果作為新藥開發(fā)的模板化合物將在藥代動力學(xué)和生物利用度方面遇到較少的問題。
　　6.建立了UPLC-MS同時測定紅衣中10個主要成分的定量方法。利用紫外分光光度法、UPLC-MS定量分析和DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)考察發(fā)現(xiàn)帶皮