流體剪切力抑制TNF-α誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究流體剪切力(fluid shear stress，F(xiàn)SS)對(duì)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)的鼠成骨樣細(xì)胞MC3T3-E1凋亡的影響，為確立生理范圍的應(yīng)力刺激骨形成提供理論依據(jù)。
　　 方法:將MC3T3-E1細(xì)胞分為TNF-α干預(yù)組(實(shí)驗(yàn)組)和無TNF-α干預(yù)組(對(duì)照組)，TNF-α(10ng/ml)×4H誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞凋亡后，四個(gè)實(shí)驗(yàn)組(0min、15min、30min、60min組)分別加載12dyn

2、e/cm2FSS并且分別作用0min、15min、30min、60min。應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)成骨細(xì)胞TNF-α[干預(yù)后及FSS作用后相對(duì)應(yīng)的增殖能力，熒光顯微鏡和流式細(xì)胞技術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)分別定性和定量檢測(cè)TNF-α誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡，免疫印跡法(western blotting，WB)檢測(cè)Caspase9和Apaf-1蛋白的表達(dá)。采用SPSS16.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(analys

3、is ofvariance，ANOVA)，多重比較應(yīng)用LSD法。相關(guān)性分析應(yīng)用非參數(shù)相關(guān)分析法Spearman秩相關(guān)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果: TNF-α(10ng/ml)×4H能誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞明顯的凋亡信號(hào)，而且隨著FSS刺激時(shí)間的增加，從0min逐漸延長(zhǎng)至60min，細(xì)胞活性逐漸增加，凋亡細(xì)胞數(shù)逐漸減少，表現(xiàn)明顯的時(shí)間相關(guān)性，Spearman秩相關(guān)分析顯示相關(guān)系數(shù)r=-0.986，p＜0.0

4、5，F(xiàn)SS時(shí)間與凋亡率有顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。而FSS(12dyne/cm2)能明顯抑制這種凋亡和上述細(xì)胞改變，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組單因素方差分析(F=1.976，P=0.000)及各組間LSD兩兩比較(P＜0.05)有顯著性差異，同時(shí)Caspase9和Apaf-1蛋白的表達(dá)在TNF-α誘導(dǎo)后大量表達(dá)，而隨FSS作用時(shí)間的增加其表達(dá)逐漸降低。
　　 結(jié)論:生理范圍的FSS能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的MC3T3-E1細(xì)胞的凋亡，作為線粒體通路的