鋅缺乏通過(guò)線(xiàn)粒體途徑誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：
　　 骨質(zhì)疏松癥是指單位體積骨量減少伴有骨強(qiáng)度的降低,在目前世界的常見(jiàn)病、多發(fā)病中居第7位。骨質(zhì)疏松所導(dǎo)致的骨折等并發(fā)癥可導(dǎo)致殘疾、死亡,治療耗資大,給患者、家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。鋅作為人與動(dòng)物生長(zhǎng)過(guò)程中的一個(gè)必不可少的微量營(yíng)養(yǎng)元素,在骨骼的生長(zhǎng)、發(fā)育和維持正常骨量中都起到了重要的作用,鋅缺乏是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的重要因素之一。骨質(zhì)疏松主要與骨形成和骨吸收的動(dòng)態(tài)平衡破壞相關(guān)。其中成骨細(xì)胞的數(shù)量和活性決定了骨形成水平,從而影

2、響骨量。凋亡作為細(xì)胞生理、病理的最終階段,成骨細(xì)胞的凋亡在骨質(zhì)疏松當(dāng)中起到了重要的作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)線(xiàn)粒體相關(guān)凋亡途徑,探討鋅缺乏時(shí)成骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　 方法：
　　 常規(guī)培養(yǎng)和傳代鼠成骨細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,鋅離子螯合劑TPEN制造鋅缺乏模型,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖,并確立合適的TPEN濃度。實(shí)驗(yàn)分為四組:正常組:細(xì)胞正常培養(yǎng)不加處理因素;TPEN組:培養(yǎng)基中加入終濃度味5μM的TPEN

3、,不加鋅離子;鋅缺乏組:培養(yǎng)基中加入終濃度5μM的TPEN和1μM的鋅離子;鋅充足組:培養(yǎng)基中加入終濃度5μM的TPEN和15μM的鋅離子。培養(yǎng)24小時(shí)后,AnnexinV-FITC/PI流式檢測(cè)成骨細(xì)胞凋亡,JC-1流式檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位,提取線(xiàn)粒體蛋白,Westernblot檢測(cè)線(xiàn)粒體中Bax蛋白表達(dá)水平,以及細(xì)胞質(zhì)中AIF、cytochromec、Caspase-9、Caspase-3蛋白表達(dá)水平,免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)AIF和cyto

4、chromec的線(xiàn)粒體釋放。采用SPSS17.1統(tǒng)汁學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)采用-x±s表示,多組間差異顯著性選用單因素方差分析多組間比較,組間比較選用SNK方法,P＜0.05表明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 TPEN對(duì)MC3T3-E1的增殖有明顯的抑制作用,并呈劑量效應(yīng)關(guān)系,24和48h的IC50分別為3.32μM和2.18μM。與正常組和鋅充足組相比,TPEN組和鋅缺乏組,細(xì)胞凋亡明顯增加,線(xiàn)粒體膜電位顯著