磺脲類藥物對小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1自噬、凋亡和功能的影響.pdf

1、背景：
　　 骨質(zhì)疏松癥( Osteoporosis)是以骨形成和骨吸收失衡為主要機(jī)理的常見的骨骼系統(tǒng)疾病，易引起脆性骨折，致殘率高，可嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。據(jù)調(diào)查顯示，2型糖尿病患者中骨質(zhì)疏松的發(fā)病率較高，約為30％-50%，且其引起的骨折風(fēng)險(xiǎn)呈逐年增加的趨勢，此風(fēng)險(xiǎn)不僅與年齡、體重指數(shù)(BMI)和骨密度等因素相關(guān)，和糖尿病并發(fā)癥及糖尿病藥物的應(yīng)用等也有潛在的關(guān)系存在。英國普通醫(yī)療研究數(shù)據(jù)庫（UK-based General

2、 Practice Research Database，UK-GPRD）的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，服用不同劑量磺脲類藥物的患者與對照組相比，發(fā)生骨折風(fēng)險(xiǎn)的OR值為1.16-1.26。已知大部分T2DM患者的骨量減少與β細(xì)胞的功能有關(guān)，近年也有研究發(fā)現(xiàn)磺脲類藥物的過度刺激可使β細(xì)胞的功能衰退甚至凋亡，但磺脲類藥物的應(yīng)用是否在糖尿病性骨質(zhì)疏松(Diabetic Osteoporosis，DOP)的發(fā)生發(fā)展中起作用至今尚無定論。本實(shí)驗(yàn)通過研究臨床中常用

3、的二代磺脲類藥物對成骨細(xì)胞MC3T3-E1自噬、凋亡及功能的影響，探討其在DOP的發(fā)生發(fā)展中的可能的作用，為T2DM患者的臨床合理用藥及DOP的預(yù)防提供思路。
　　 目的：
　　 研究臨床中常用的二代磺脲類藥物（格列本脲、格列齊特和格列吡嗪）對小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1自噬、凋亡及其功能的影響。
　　 方法：
　　 以傳代小鼠成骨細(xì)胞株MC3T3-E1為研究對象，選取格列本脲、格列齊特和格列吡嗪對其進(jìn)行

4、處理，設(shè)立溶劑對照組及高、中、低藥物濃度組，干預(yù)不同時(shí)間，通過SRB染色法檢測不同濃度的格列本脲、格列齊特和格列吡嗪對成骨細(xì)胞存活率的影響，并確立后續(xù)試驗(yàn)的藥物干預(yù)濃度；Westem blot實(shí)驗(yàn)分析格列本脲、格列齊特和格列吡嗪干預(yù)的成骨細(xì)胞中自噬、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的變化；通過Hoechst染色鏡下觀察以上三種藥物對細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)影響；ELISA法行骨鈣素(OCN)含量測定和堿性磷酸酶(ALP)活性測定，以研究藥物對MC3T3-E1細(xì)

5、胞分化功能的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.與溶劑對照組相比，中、高濃度的格列本脲、格列齊特和格列吡嗪使MC3T3-E1細(xì)胞存活率降低（P＜0.05）。
　　 2.與溶劑對照組相比，干預(yù)濃度為10μM時(shí)，格列本脲、格列齊特和格列吡嗪使MC3T3-E1細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白LC3Ⅱ和凋亡標(biāo)志蛋白PARP的切割帶表達(dá)增加（P＜0.05），抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)減少(P＜0.01)，mTOR信號途徑標(biāo)志蛋白P-p70的表達(dá)