纈沙坦對擴張型心肌病大鼠心肌線粒體結構及功能的影響.pdf

1、目的:探討血管緊張素Ⅱ-1型受體阻滯劑纈沙坦對擴張型心肌病大鼠充血性心衰預保護作用的機制。
　　 方法:40只SD大鼠完全隨機分為3組,正常對照組(C組,n=10),擴張型心肌病模型組(M組,n=15),纈沙坦干預組(V組,n=15)。M組及V組給予多柔比星(2mg·kg-1,每周1次)腹腔內(nèi)注射法建模,Ⅴ組在建模同時給予纈沙坦(30mg·kg-1·d-1)灌胃,共8周。①心功能檢測:超聲心動圖檢測左室舒張末徑(LVEDD)、左

2、室收縮末內(nèi)徑(LVESD)、左室射血分數(shù)(INEF)及左室短軸縮短率(LVFS)；②超微結構檢測:電鏡下觀察各組大鼠心肌線粒體超微結構；③比色法檢測各組大鼠心肌細胞內(nèi)氧化應激指標[丙二醛(MDA)/總SOD/CuZn-SOD/Mn-SOD]的改變；④2’,7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽(DCFH-DA)熒光探針檢測各組大鼠心肌細胞內(nèi)活性氧(ROS)的生成；⑤Rhodamine123染色檢測各組大鼠心肌線粒體膜電位；⑥比色法檢測Na+K+-AT

3、P酶及Ca2+Mg2+-ATP酶的水平；⑦比色法測定各組大鼠心肌線粒體在高鈣誘導下腫脹度；⑧免疫組化檢測心肌細胞內(nèi)第二個線粒體來源的胱氨酸酶激活劑(Smac)蛋白的表達；⑨Western blot法測定心肌細胞內(nèi)凋亡誘導因子(AIF)及Smac蛋白表達水平。
　　 結果:
　　 ①各組大鼠超聲心動圖檢測結果:與C組相比,M組LVEDD顯著增大[(6.52±0.32)vs(5.83±0.45)mm,P<0.05],V組LN

4、EDD為(6.08±0.54)mm,較C組增大(P>0.05),而較M組減小(P>0.05)；與C組相比,M組LVESD顯著增大[(3.47±0.20)vs(2.55±0.19)mm,P<0.05],Ⅴ組LVESD為(3.02±0.23)mm,較C組顯著增大(P<0.05),而較M組顯著減小(p<0.05)；與C組相比,M組LVEF顯著下降[(83.00±1.31)vs(90.254±2.31)％,P<0.05],V組LVEF為(86.

5、134±1.36)％,較C組顯著下降(P<0.05),而較M組顯著上升(P<0.05)；與C組相比,M組LVFS顯著下降[(46.88±1.46)vs(56.13±3.64)％,P<0.051,V組LVFS為(50.13±1.36)％,較C組顯著下降(P<0.05),而較M組顯著上升(P<0.05)。
　　 ②各組大鼠心肌線粒體超微結構觀察:與C組比較,M組線粒體體積明顯增大、嵴斷裂、空泡化,而Ⅴ組線粒體超微結構完整性要較M組明

6、顯改善。
　　 ③各組大鼠心肌細胞氧化應激指標的檢測結果:與C組比較,M組MDA水平顯著增高[(1.53±0.32)vs(0.86±0.29)nmol/mgprot,P<0.05],Ⅴ組MDA為(1.04±0.31)nmol/mgprot,較C組增高(P>0.05),而較M組顯著降低(P<0.05)；與C組比較,M組總SOD(T-SOD)水平顯著降低[(75.69±7.51)vs(99.13±11.64)U/mgprot,P<0

7、.05],V組T-SOD為(93.44±9.70)U/mgprot,較C組降低(P>0.05)而較M組顯著增高(P<0.05)；與C組比較,M組CuZn-SOD顯著下降[(68.20±10.42)vs(91.06±14.37)U/mgprot,P<0.05],V組CuZn-SOD為(85.38±5.57)U/mgprot,較C組下降(P>0.05),而較M組顯著改善(P<0.05)；與C組比較,M組Mn-SOD水平顯著降低[(2.99±

8、2.53)vs(6.42±1.75)U/mgprot,P<0.051,V組Mn-SOD為(3.88±1.49)U/mgprot,較C組顯著下降(P<0.05),而較M組略增高(P>0.05)。
　　 ④各組大鼠心肌細胞內(nèi)ROS檢測結果:與C組比較,M組大鼠心肌細胞ROS熒光強度顯著增強,而V組ROS熒光強度較C組增強而較M組減弱。
　　 ⑤各組大鼠心肌線粒體膜電位結果:與C組比較,M組心肌線粒體Rh123熒光強度顯著下降

9、[(386.93±67.92)vs(548.10±74.91),P<0.05]；V組心肌線粒體Rh123熒光強度為(450.66±45.43),較C組顯著下降(P<0.05),而較M組顯著增高(P<0.05)。
　　 ⑥各組大鼠心肌細胞內(nèi)ATP酶檢測結果:與C組比較,M組Na+K+-ATP酶顯著降低[(18.77±1.63)vs(26.56±2.99)U/mgprot,P<0.05],V組Na+K+-ATP酶為(21.14±1.

10、48)U/mgprot,較C組顯著下降(P<0.05),而較M組顯著增高(P<0.05)；與C組比較,M組Ca2+Mg2+-ATP酶顯著降低[(12.29±1.24)vs(19.44±2.75)U/mgprot,P<0.05],Ⅴ組Ca2+Mg2+-ATP酶為(14.01±1.95)U/mgprot,較C組顯著降低(P<0.05),而較M組略增高(P>0.05)。
　　 ⑦各組大鼠心肌線粒體腫脹度檢測結果:C組對高鈣誘發(fā)的腫脹最

11、敏感,而Ⅴ組又較M組對高鈣刺激的腫脹敏感。
　　 ⑧各組大鼠心肌細胞中Smac蛋白免疫組織化學檢測結果:C組大鼠心肌細胞中,大部分為胞漿藍染的陰性細胞,僅見少量的Smac性細胞；M組和V組大鼠心肌細胞中Smac陽性細胞數(shù)顯著高于C組,胞漿中可見大量的棕黃色顆粒；與M組相比,V組大鼠心肌細胞中兩種蛋白陽性的細胞數(shù)顯著減少。
　　 ⑨各組大鼠心肌細胞中Smac及AIF蛋白Western blot檢測結果:與C組比較,M組心肌

12、細胞的Smac蛋白表達水平顯著增高[(0.69±0.05)vs(0.23±0.08),P<0.05],而V組Rsmac/β-actin的相當灰度值為(0.43±0.10),較C組明顯增高(P<0.05),而較M組明顯降低(P<0.05)。與C組比較,M組心肌細胞的.AIF蛋白表達水平顯著增高[(0.78±0.06)vs(0.41±0.12),P<0.05],V組RAIF/β-actin的值為(0.52±0.11),較C組略增高(P>0.