砷對Nrf2相關(guān)基因及抗氧化指標(biāo)影響研究.pdf

1、目的:觀察砷對家兔皮膚組織角化損傷的影響;探討砷對家兔皮膚組織中相關(guān)抗氧化酶水平、8-OHdG、MDA含量水平的影響;分析砷代謝水平，探討皮膚組織抗氧化水平與尿中砷甲基化產(chǎn)物之間的關(guān)聯(lián)性;分析砷對Keap1/Nrf2-ARE通路中Keap-1、Nrf2及相關(guān)抗氧化酶GCLC mRNA表達(dá)的影響。
　　方法:亞慢性砷染毒成年健康清潔級雄性家兔30只，隨機(jī)分為5組，即0（對照）、0.075(1/100 LD50)、0.15(1/50

2、LD50)、0.375(1/20 LD50)、0.75(1/10 LD50) mg/(kg.w)，每組6只。染毒12周采集各組染砷家兔皮膚組織，通過電鏡觀察各砷染毒組家兔皮膚組織的角化損傷情況。通過相應(yīng)試劑盒方法檢測染砷家兔皮膚中8-OHdG、MDA、HO-1、MPO含量水平和CAT、GSH-Px的活力水平。同時采用高效液相色譜-氫化物發(fā)生原子熒光光譜(HPLC-HGAFS)法檢測家兔尿中As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、一甲基胂酸(MMA)和二

3、甲基胂酸(DMA)含量，分析砷代謝情況[一甲基化率(PMI)、二甲基化率(SMI)]。通過實(shí)時熒光定量PCR(Real-Time Quantitative PCR)法檢測家兔皮膚組織中keap1、Nrf2和GCLC mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:0.150 mg/(kg.w)砷染毒組家兔皮膚出現(xiàn)角質(zhì)異?，F(xiàn)象，隨砷染毒劑量的升高，家兔皮膚角化損傷程度有所加重。0.750 mg/(kg.w)砷染毒劑量組家兔皮膚明顯角化，細(xì)胞核嚴(yán)重不

4、規(guī)則，異染色質(zhì)聚集等現(xiàn)象。與對照組比較，0.150、0.375、0.750 mg/(kg.w)砷染毒劑量組家兔皮膚組織中CAT活力水平、HO-1含量水平以及0.750 mg/(kg.w)砷染毒劑量組GSH-Px活力水平較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與對照組比較，0.375、0.750 mg/(kg.w)砷染毒劑量組家兔皮膚組織中DMA含量水平與0.750 mg/(kg.w)砷染毒劑量組8-OHdG含量水平較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義(P＜0.05);與對照組比較，0.750 mg/(kg.w)砷染毒劑量組家兔尿中總砷(TAs)、As(Ⅲ)、DMA的含量水平和0.375、0.750 mg/(kg.w)砷染毒劑量組家兔尿中MMA含量水平及各劑量砷染毒劑量組PMI值以及0.150、0.375、0.750mg/(kg.w)砷染毒劑量組SMI值均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)， HO-1含量水平、GSH-Px活力水平與MMA含量水平及PMI值均呈負(fù)相

6、關(guān)關(guān)系(P＜0.05);MDA、8-OHdG含量水平與MMA含量水平及PMI值均呈正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。家兔皮膚組織中Keap-1 mRNA表達(dá)量由對照組至0.750 mg/(kg.w)砷染毒劑量組呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，0.075 mg/（kg.w）砷染毒劑量組Keap-1mRNA表達(dá)量較低，0.750 mg/(kg.w)砷染毒劑量組表達(dá)量較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。Nrf2及GCLCmRNA表達(dá)量由對照組至0.7

7、50 mg/(kg.w)砷染毒劑量組均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，0.075、0.150mg/（kg.w）砷染毒劑量組Nrf2mRNA表達(dá)量與0.075mg/(kg.w)砷染毒劑量組GCLCmRNA表達(dá)量均較高，而0.750mg/(kg.w)砷染毒劑量組Nrf2 mRNA表達(dá)量與0.375、0.750mg/(kg.w)砷染毒劑量組GCLC mRNA表達(dá)量均較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:亞慢性砷染毒隨劑量的升高可