cGVHD小鼠Nrf2抗氧化通路、調(diào)節(jié)性B細(xì)胞水平及免疫炎癥反應(yīng)的研究.pdf

1、目的:建造異基因造血干細(xì)胞移植（allo-HSCT）術(shù)后小鼠慢性移植物抗宿主病（cGVHD）模型，檢測cGVHD小鼠Nrf2抗氧化通路、氧化應(yīng)激、調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Bregs）及相關(guān)免疫炎癥反應(yīng)的水平，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中初步探討它們在cGVHD發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:以雄性BALB/c(H-2d)小鼠作為供鼠，雌性CB6F1(B6)(H-2b)小鼠作為受鼠，受鼠經(jīng)過致死性全身照射(TBI)(9.0Gy)預(yù)處理后，4-6小時(shí)內(nèi)經(jīng)尾靜脈注

2、射供鼠骨髓細(xì)胞（8×106）及脾臟細(xì)胞（6-7×107）混懸液，建立Scl-cGVHD小鼠模型。本實(shí)驗(yàn)分組如下：①對照組；②致死性全身照射（TBI）組：雌性CB6F1小鼠只接受照射不移植；③同基因移植（synBMT）組：雄性CB6F1小鼠作為移植供鼠（供受鼠同源）；④異基因移植（alloBMT）組：雄性BALB/c小鼠作為供鼠（供受鼠非同源）。各組小鼠均于移植后27-33天處死。cGVHD臨床評分和組織病理學(xué)分析共同作為評判cGVHD的

3、標(biāo)準(zhǔn)。第一部分：活性氧（ROS）試劑檢測小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）的氧化活性水平；Western blot檢測各組小鼠骨髓、肝臟中Nrf2抗氧化通路蛋白表達(dá)水平，實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測檢測各組小鼠骨髓、肝臟中Nrf2抗氧化通路mRNA水平。第二部分：小鼠外周血中Bregs（CD19+CD5+CD1d+B細(xì)胞）的比例采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測；小鼠血漿中炎癥抑制因子白介素-10（IL-10）和纖維生成相關(guān)因子-β1（TGF-β1）的

4、水平采用ELISA進(jìn)行檢測。
　　本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,所有計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示；所有計(jì)數(shù)資料行卡方檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:成功構(gòu)建Scl-cGVHD小鼠模型：小鼠cGVHD臨床評分和組織病理學(xué)分析均提示alloBMT組小鼠發(fā)生cGVHD，而synBMT組小鼠未見cGVHD發(fā)生；第一部分①活性氧檢測結(jié)果顯示alloBMT組（cGVHD）小鼠PMBCs中ROS水平較synBMT組（no

5、n-cGVHD）小鼠顯著升高（P＜0.05）；②Western blotting結(jié)果顯示cGVHD小鼠肝臟及脾臟Nrf2， NQO1及 HO-1蛋白表達(dá)水平均較non-cGVHD小鼠顯著降低（P＜0.05）；③實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果顯示cGVHD小鼠肝臟及脾臟Nrf2，NQO1及 HO-1mRNA水平水平均比較non-cGVHD小鼠顯著降低（P＜0.05）；第二部分①流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示cGVHD小鼠外周血中Bregs水平較non-cG

6、VHD小鼠顯著降低（P＜0.05）；②ELISA檢測結(jié)果顯示cGVHD小鼠血漿中IL-10水平較non-cGVHD小鼠顯著下降（P＜0.001）；而TGF-β1水平無顯著差異(P=0.264)。
　　結(jié)論:本研究首次報(bào)道了allo-HSCT后cGVHD小鼠體內(nèi)Nrf2抗氧化信號通路下調(diào)，氧化應(yīng)激水平增高。研究尚顯示cGVHD小鼠外周血Bregs水平明顯降低，且細(xì)胞因子IL-10水平（與Bregs免疫抑制活性有關(guān)）也顯著降低。Nrf