孕激素在子癇前期發(fā)病機(jī)理TLR4信號(hào)通路中的作用研究.pdf

1、目的：研究孕激素在子癇前期(preeclampsia,PE)孕婦外周血血漿中的水平及其在子癇前期發(fā)病機(jī)制Toll樣受體4(toll-likereceptor4,TLR4)信號(hào)通路中的作用。
　　方法：選擇30例子癇前期孕婦,年齡:28±5歲,孕周34.1±4.1周,用稀釋定量法測(cè)定其血漿孕激素水平,并與正常孕婦對(duì)照;原代培養(yǎng)子癇前期孕婦外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC),以不

2、同濃度孕激素(0M、10-8M、10-6M、10-4M)刺激,實(shí)時(shí)定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)(Real-timepolymeraseChainreaction,real-timePCR)檢測(cè)TLR4mRNA、髓樣細(xì)胞分化蛋白88(myeloiddifferentiationfactor88,MyD88)mRNA、核轉(zhuǎn)錄因子-kappaB(nuclearfactorkB,NF-kB)mRNA的表達(dá);免疫印跡法Westernblot檢測(cè)Ikappa-

3、B蛋白的表達(dá),用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)檢測(cè)細(xì)胞上清液中腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactors,TNF-α)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表達(dá)。
　　結(jié)果：子癇前期孕婦血漿孕激素水平為:376.524nmol/L±145.89nmol/L,正常孕婦血漿孕激素水平為:438.007nmol/L±148.124nmol/L

4、,兩組比較差異有顯著性,P<0.05。隨著孕激素濃度的增加,TLR4mRNA、MyD88mRNA及NF-κBmRNA的相對(duì)表達(dá)量(2-?CT)逐漸減少,其相對(duì)表達(dá)量分別為:TLR4mRNA:空白組:1.462±1.102,10-8M組:1.260±0.413,10-6M組:0.852±0.218,10-4M組:0.584±0.029;MyD88mRNA:空白組:1.052±0.269,10-8M組:0.705±0.037,10-6M組:

5、0.2944±0.019,10-4M組:0.097±0.011;NF-κBmRNA:空白組:2.341±0.326,10-8M組:1.045±0.393,10-6M組:0.0212±0.008,10-4M組:0.006±0.0013,各組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且p<0.05,IkappaB蛋白的表達(dá)隨著孕激素濃度的增加而升高,其OD比值為:空白組:0.187±0.015,10-8M組:0.777±0.047,10-6M組:1.42±0.

6、092,10-4M組:2.3±0.243,且各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:P<0.05;隨著孕激素濃度的增加,細(xì)胞上清中細(xì)胞因子TNF-α(空白組:5.733pg/ml±0.208pg/ml,10-8M組:3.100pg/ml±0.201pg/ml,10-6M組:2.101pg/ml±0.098pg/ml,10-4M組:1.100pg/ml±0.057pg/ml)及IL-6(空白組:215.80pg/ml±34.67pg/ml,10-8M