視黃酸(RA)對斑馬魚胚胎的毒理學(xué)研究.pdf

1、視黃酸(RA)是小分子、脂溶性形態(tài)的信號分子，來源于人體必需營養(yǎng)素維生素A，在胚胎早期發(fā)育過程中起著重要作用。因此，視黃酸的過量或缺少對機(jī)體的發(fā)育都會產(chǎn)生顯著地影響。本文用斑馬魚作為模式生物，研究RA暴毒對胚胎早期的發(fā)育毒性和神經(jīng)行為毒性以及與環(huán)境毒物PBDEs聯(lián)合暴露對神經(jīng)行為毒性的挽救作用。野生型AB品系胚胎在3-120hpf期間暴毒于不同濃度的RA溶液中，120hpf時觀察發(fā)現(xiàn)RA引起半數(shù)胚胎死亡的濃度(LC50)為17.31nM

2、，引起半數(shù)胚胎致畸的濃度(EC50)為2.47nM。在使用fli-1轉(zhuǎn)基因斑馬魚進(jìn)行暴露實(shí)驗(yàn)時發(fā)現(xiàn):RA可使胚胎的血管缺失、增生和交叉等血管畸變形態(tài)，8nM RA暴露斑馬魚胚胎的致畸效果顯著。典型畸形有尾部彎曲、卵黃囊腫、心包囊腫、游囊關(guān)閉和色素沉著等。RA的暴露嚴(yán)重影響了仔魚的運(yùn)動行為，使得仔魚自主運(yùn)動頻率顯著增加。同時導(dǎo)致5dpf斑馬魚仔魚光照和黑暗條件下運(yùn)動活力均上升及適應(yīng)性下降（光暗刺激表現(xiàn)為過激運(yùn)動）等行為特征。在細(xì)胞凋亡試驗(yàn)

3、中證實(shí)，RA可致24hpf斑馬魚仔魚眼部、尾部細(xì)胞凋亡。qRT-PCR定量分析表明運(yùn)動相關(guān)基因hox和nog表達(dá)下降，而opn1sw1、rho和rgr三個視覺相關(guān)基因的表達(dá)顯著升高。斑馬魚胚胎整體原進(jìn)一步定位和驗(yàn)證了視神經(jīng)中變化的基因opn1sw1和rho的表達(dá)，結(jié)果顯示RA暴毒后opn1sw1和rho基因顯著升高了染色結(jié)果。總之，2nM RA暴露仔魚表觀不出現(xiàn)顯著畸形，運(yùn)動行為能力明顯提高，＞2nM RA可致斑馬魚胚胎發(fā)育畸形、細(xì)胞凋

4、亡和血管畸變等。這些數(shù)據(jù)可以為我們進(jìn)一步深入研究RA對斑馬魚胚胎毒性的分子機(jī)制研究提供重要的基礎(chǔ)。
　　 另外，多溴聯(lián)苯醚(PBDEs)是一類污染極其廣泛的環(huán)境污染物，對環(huán)境和人類具有健康風(fēng)險，對水生生物具有行為毒性效應(yīng)。為了研究視黃酸(Retinoicacid，RA)對這種行為毒性的挽救作用，利用斑馬魚為模式生物，采取水體暴露法，計(jì)算機(jī)攝像跟蹤技術(shù)，以正常水體中仔魚的行為變化為基礎(chǔ)，對比視黃酸和多溴聯(lián)苯醚單獨(dú)暴露仔魚的行為變化

5、，進(jìn)而來評估視黃酸和多溴聯(lián)苯醚聯(lián)合暴露下仔魚的個體行為（穩(wěn)定光照、黑暗和光暗交替刺激下的泳動速度）的變化規(guī)律。通過仔魚的自由泳活力和光暗刺激等行為指標(biāo)來評價視黃酸對仔魚運(yùn)動行為的挽救作用。RA聯(lián)合BDE-47在穩(wěn)定光照和黑暗條件下，仔魚的自由泳動速度相對BDE-47單獨(dú)處理組顯著升高(p＜0.05)，與正常水體中仔魚運(yùn)動速度極為接近。同樣，RA聯(lián)合BDE-209在穩(wěn)定光照和黑暗下，仔魚的自由泳動速度相對于BDE-209處理組都是顯著升高