視黃酸(RA)對斑馬魚胚胎的毒理學研究.pdf

1、視黃酸(RA)是小分子、脂溶性形態(tài)的信號分子，來源于人體必需營養(yǎng)素維生素A，在胚胎早期發(fā)育過程中起著重要作用。因此，視黃酸的過量或缺少對機體的發(fā)育都會產(chǎn)生顯著地影響。本文用斑馬魚作為模式生物，研究RA暴毒對胚胎早期的發(fā)育毒性和神經(jīng)行為毒性以及與環(huán)境毒物PBDEs聯(lián)合暴露對神經(jīng)行為毒性的挽救作用。野生型AB品系胚胎在3-120hpf期間暴毒于不同濃度的RA溶液中，120hpf時觀察發(fā)現(xiàn)RA引起半數(shù)胚胎死亡的濃度(LC50)為17.31nM

2、，引起半數(shù)胚胎致畸的濃度(EC50)為2.47nM。在使用fli-1轉基因斑馬魚進行暴露實驗時發(fā)現(xiàn):RA可使胚胎的血管缺失、增生和交叉等血管畸變形態(tài)，8nM RA暴露斑馬魚胚胎的致畸效果顯著。典型畸形有尾部彎曲、卵黃囊腫、心包囊腫、游囊關閉和色素沉著等。RA的暴露嚴重影響了仔魚的運動行為，使得仔魚自主運動頻率顯著增加。同時導致5dpf斑馬魚仔魚光照和黑暗條件下運動活力均上升及適應性下降（光暗刺激表現(xiàn)為過激運動）等行為特征。在細胞凋亡試驗

3、中證實，RA可致24hpf斑馬魚仔魚眼部、尾部細胞凋亡。qRT-PCR定量分析表明運動相關基因hox和nog表達下降，而opn1sw1、rho和rgr三個視覺相關基因的表達顯著升高。斑馬魚胚胎整體原進一步定位和驗證了視神經(jīng)中變化的基因opn1sw1和rho的表達，結果顯示RA暴毒后opn1sw1和rho基因顯著升高了染色結果?？傊?nM RA暴露仔魚表觀不出現(xiàn)顯著畸形，運動行為能力明顯提高，＞2nM RA可致斑馬魚胚胎發(fā)育畸形、細胞凋

4、亡和血管畸變等。這些數(shù)據(jù)可以為我們進一步深入研究RA對斑馬魚胚胎毒性的分子機制研究提供重要的基礎。
　　 另外，多溴聯(lián)苯醚(PBDEs)是一類污染極其廣泛的環(huán)境污染物，對環(huán)境和人類具有健康風險，對水生生物具有行為毒性效應。為了研究視黃酸(Retinoicacid，RA)對這種行為毒性的挽救作用，利用斑馬魚為模式生物，采取水體暴露法，計算機攝像跟蹤技術，以正常水體中仔魚的行為變化為基礎，對比視黃酸和多溴聯(lián)苯醚單獨暴露仔魚的行為變化

5、，進而來評估視黃酸和多溴聯(lián)苯醚聯(lián)合暴露下仔魚的個體行為（穩(wěn)定光照、黑暗和光暗交替刺激下的泳動速度）的變化規(guī)律。通過仔魚的自由泳活力和光暗刺激等行為指標來評價視黃酸對仔魚運動行為的挽救作用。RA聯(lián)合BDE-47在穩(wěn)定光照和黑暗條件下，仔魚的自由泳動速度相對BDE-47單獨處理組顯著升高(p＜0.05)，與正常水體中仔魚運動速度極為接近。同樣，RA聯(lián)合BDE-209在穩(wěn)定光照和黑暗下，仔魚的自由泳動速度相對于BDE-209處理組都是顯著升高