人骨髓間充質(zhì)干細胞向膽堿能神經(jīng)元樣細胞定向分化的實驗研究.pdf

1、目的: 探討人骨髓間充質(zhì)干細胞(BMMSCs)的體外分離、純化、擴增和向膽堿能神經(jīng)元樣細胞的定向分化潛能，以期為BMMSCs的神經(jīng)移植提供理論依據(jù)。 方法: 應用密度梯度離心法體外分離出BMMSCs，在含10％FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)擴增和傳代，用流式細胞儀檢測BMMSCs的表面標志。利用擴增后的第二代BMMSCs進行誘導分化，分為實驗組和對照組。實驗組的細胞先用含40mg/L WHI-P131的完全培養(yǎng)基預

2、處理48小時后，在含10ng/ml重組人堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的完全培養(yǎng)基中預誘導24小時，最后以含1 μmol/L全反式維甲酸(ATRA)和10ng/ml音速波狀蛋白(Shh)的完全培養(yǎng)基誘導5小時；對照組不加任何誘導劑。誘導過程中在相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化，然后進行神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)、神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和乙酰膽堿轉移酶(ChAT)等神經(jīng)細胞特異性標志的免疫細胞化學染色，并分別計算陽性細胞百分率

3、。 結果: 分離擴增后的BMMSCs強表達CD29;較強表達CD44、CD166和CD105；不表達CD45、CD34和HLA-DR。實驗組BMMSCs經(jīng)誘導后均能分化為具有典型神經(jīng)元形態(tài)的細胞，并表達NSE(61.00±3.63)％、GFAP(14.42±2.74)％；且相當部分神經(jīng)元樣細胞表達ChAT(9.92±1.29)％。對照組BMMSCs細胞形態(tài)無明顯變化，且上述特異性標志物表達均為陰性。 結論: BMMSCs