多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤病2型的臨床及遺傳學(xué)研究.pdf

1、多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤病2型(Multiple Endocrine Neoplasia Type2，MEN2)是一種常染色體顯性遺傳病，發(fā)生率約為1/30000，按照臨床表現(xiàn)將MEN2分為MEN2A、MEN2B和家族性甲狀腺髓樣癌(Familiar MedullaryThyroid Carcinoma，F(xiàn)MTC)。MEN2A特征為主要發(fā)生甲狀腺髓樣癌(Medullary Thyroid Carcinoma，MTC)，約50％伴發(fā)腎上腺嗜鉻細胞

2、瘤(Pheochromocytoma)，20-30％伴發(fā)甲狀旁腺腺瘤(PrimaryHyperparathyroid Adenoma，PHPT);MEN2B除發(fā)生MTC、PCC外還可伴有神經(jīng)粘膜瘤(Ganglioneuromatosis)、骨骼發(fā)育異常等，但是不發(fā)生甲狀旁腺腺瘤;FMTC則為家族中僅發(fā)生MTC而無其他腫瘤的發(fā)生。RET原癌基因突變被認為是MEN2的致病基因，RET基因型和MEN2臨床表型之間存在一定的相關(guān)關(guān)系。目前尚缺乏

3、針對MEN2的大規(guī)模中國人群研究以及除RET基因突變之外其他導(dǎo)致MEN2發(fā)生發(fā)展的分子機制研究。
　　本研究首先總結(jié)分析了上海市內(nèi)分泌代謝病臨床醫(yī)學(xué)中心自2002年1月至2013年3月間收集的來自全國的53個獨立的MEN2家系，其中MEN2A先證者共45例，MEN2B先證者共8例，對先證者及其家系成員共372人進行相關(guān)臨床及遺傳資料進行采集，提取外周血DNA對RET基因熱點突變位點（第8、10、11、13、14、15、16外顯子）

4、設(shè)計引物PCR直接測序，分析中國人群RET基因型和MEN2臨床表型的特點及相關(guān)關(guān)系。結(jié)果共檢測出攜帶外周RET基因突變者135例，其中MEN2A為125例，MEN2B為10例。MEN2先證者中RET基因突變類型11種，其中10種為MEN2A突變，分別為p.C634R(n=19,42.22％),p.C634Y(n=12,26.67％),p.C634W(n=4,8.89％),p.C634S(n=3,6.67％),p.C634F(n=2,4.

5、44％),p.C620R(n=1,2.22％),p.C620S(n=1,2.22％),p.C611Y(n=1,2.22％),p.C618R(n=1,2.22％),p.E768D(n=1，2.22％);MEN2B均為p.M918T(n=8，100％)。其中p.C620R，p.C620S，p.C611Y和p.E768D四種基因型為首次在MEN2中國人群中報道。比較攜帶RET基因第10號和11號外顯子突變患者的臨床表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)10號外顯子突變患

6、者均不伴有甲狀旁腺腫瘤，MTC的發(fā)生晚于11號外顯子突變的患者(p＜0.05)，推測可能是由于11號外顯子突變更為接近跨膜區(qū)，增加了發(fā)病風(fēng)險。而對于634位點的5種不同突變類型，攜帶者首次PCC手術(shù)年齡存在統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)，推測可能是不同突變類型影響RET蛋白的空間結(jié)構(gòu)從而導(dǎo)致不同激酶活性。MEN2相關(guān)的MTC患者發(fā)病年齡明顯早于散發(fā)MTC患者(36.27±14.34 vs45.34±13.57，p＜0.01)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高

7、于后者(62.50％ vs39.29％，p＜0.05)。
　　在闡明已知RET基因型和MEN2相關(guān)關(guān)系的基礎(chǔ)上，本研究進一步利用Affymetrix SNP6.0芯片和外顯子組測序技術(shù)，在基因組范圍尋找除RET基因突變之外與MEN2發(fā)病相關(guān)的分子機制。第一階段的分析包括4例MEN2A患者配對的腫瘤組分及外周血DNA。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MEN2腫瘤組分平均突變數(shù)目顯著少于非內(nèi)分泌腫瘤(7.58 vs65.60，P＜0.01);4例MEN2A患

8、者的9個腫瘤組織中共發(fā)現(xiàn)32個體細胞突變，其中28個突變?yōu)辄c突變，4個突變?yōu)樾∑尾迦?缺失;發(fā)現(xiàn)13個不同的基因同時存在體細胞突變或拷貝數(shù)變異。通過SIFT/POLYPHEN2進行蛋白功能預(yù)測后選取9個基因(BEX5，BHLHB9，EIF4G1，GRAP，KRT38，MLL，OR3A1，TROVE2, ZDHHC8)在獨立樣本的MTC(N=20)和PCC(N=20)組織中進行PCR直接測序驗證，未發(fā)現(xiàn)重復(fù)基因突變。進一步將突變型和野生