脂肪干細胞來源施萬細胞移植治療大鼠運動皮層損傷模型.pdf

1、施萬細胞在周圍神經系統軸突損傷修復中起著至關重要的作用。隨著組織工程技術的發(fā)展，部分學者提出用施萬細胞來修復中樞神經系統的損傷。但是由于施萬細胞為終末細胞，其來源和增殖能力有限、體外培養(yǎng)較困難，故很難獲得足夠數量的細胞，并不能完全滿足種子細胞的要求和特點。MSCs的發(fā)現為種子細胞來源問題提供了新的思路，研究表明，BMSCs在體內外均能分化成類施萬細胞。ADSCs和BMSCs不僅具有非常相似的生物學特性，而且在細胞表面標志物的表達上也非常

2、相似。與BMSCs相比較，ADSCs具有來源廣，取材方便，含量較豐富，在體外較易培養(yǎng)增殖等優(yōu)點，使得它被越來越多人重視，并很可能取代BMSCs，成為新的組織工程種子細胞來源。本試驗通過對SD大鼠腹股溝脂肪的提取和培養(yǎng)，獲得脂肪干細胞，并在體外誘導其分化成施萬細胞。然后將ADSCs來源施萬細胞移植，治療運動皮層損傷大鼠偏癱模型，取得了初步成功。 方法：采用酶消化法，取SD大鼠腹股溝脂肪組織，以加有10％FBS的低糖DMEM培養(yǎng)基，

3、在5％CO2、飽和濕度、37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，傳代。采用第4代亞融合狀態(tài)細胞，去除培養(yǎng)液，借鑒BMSCs定向分化成施萬細胞的方法，以β-ME，ATRA，Forskolin，Heregulin，bFGF，BDNF等按一定方式序貫作用下進行體外誘導分化。并行免疫組化檢測施萬細胞的特異性標志物GFAP，S-100。同時在顯微鏡下損毀大鼠運動皮層，制作出偏癱大鼠模型。最后將脂肪干細胞來源的施萬細胞移植到偏癱大鼠受損腦皮層局部，觀察試驗大鼠的運動

4、功能恢復情況并采用longo評分較客觀評價運動功能恢復程度。SPSS13.0軟件對所有數據行統計分析。 結果：利用I型膠原酶成功從SD大鼠腹股溝脂肪組織中分離出ADSCs，在體外培養(yǎng)獲得增殖和傳代，并采用骨髓干細胞定向誘導分化成施萬細胞的方法，同樣誘導分化出類施萬細胞，表現施萬細胞形態(tài)，免疫細胞化學方法染色檢測到大量細胞表達施萬細胞特異性標志物GFAP,S100。最后將ADSCs來源施萬細胞移植到運動皮層損傷的偏癱大鼠模型腦內受