脂肪干細(xì)胞來源施萬細(xì)胞移植治療大鼠運(yùn)動(dòng)皮層損傷模型.pdf

1、施萬細(xì)胞在周圍神經(jīng)系統(tǒng)軸突損傷修復(fù)中起著至關(guān)重要的作用。隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展，部分學(xué)者提出用施萬細(xì)胞來修復(fù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。但是由于施萬細(xì)胞為終末細(xì)胞，其來源和增殖能力有限、體外培養(yǎng)較困難，故很難獲得足夠數(shù)量的細(xì)胞，并不能完全滿足種子細(xì)胞的要求和特點(diǎn)。MSCs的發(fā)現(xiàn)為種子細(xì)胞來源問題提供了新的思路，研究表明，BMSCs在體內(nèi)外均能分化成類施萬細(xì)胞。ADSCs和BMSCs不僅具有非常相似的生物學(xué)特性，而且在細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)上也非常

2、相似。與BMSCs相比較，ADSCs具有來源廣，取材方便，含量較豐富，在體外較易培養(yǎng)增殖等優(yōu)點(diǎn)，使得它被越來越多人重視，并很可能取代BMSCs，成為新的組織工程種子細(xì)胞來源。本試驗(yàn)通過對SD大鼠腹股溝脂肪的提取和培養(yǎng)，獲得脂肪干細(xì)胞，并在體外誘導(dǎo)其分化成施萬細(xì)胞。然后將ADSCs來源施萬細(xì)胞移植，治療運(yùn)動(dòng)皮層損傷大鼠偏癱模型，取得了初步成功。 方法：采用酶消化法，取SD大鼠腹股溝脂肪組織，以加有10％FBS的低糖DMEM培養(yǎng)基，

3、在5％CO2、飽和濕度、37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，傳代。采用第4代亞融合狀態(tài)細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，借鑒BMSCs定向分化成施萬細(xì)胞的方法，以β-ME，ATRA，F(xiàn)orskolin，Heregulin，bFGF，BDNF等按一定方式序貫作用下進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化。并行免疫組化檢測施萬細(xì)胞的特異性標(biāo)志物GFAP，S-100。同時(shí)在顯微鏡下?lián)p毀大鼠運(yùn)動(dòng)皮層，制作出偏癱大鼠模型。最后將脂肪干細(xì)胞來源的施萬細(xì)胞移植到偏癱大鼠受損腦皮層局部，觀察試驗(yàn)大鼠的運(yùn)動(dòng)

4、功能恢復(fù)情況并采用longo評分較客觀評價(jià)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)程度。SPSS13.0軟件對所有數(shù)據(jù)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：利用I型膠原酶成功從SD大鼠腹股溝脂肪組織中分離出ADSCs，在體外培養(yǎng)獲得增殖和傳代，并采用骨髓干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化成施萬細(xì)胞的方法，同樣誘導(dǎo)分化出類施萬細(xì)胞，表現(xiàn)施萬細(xì)胞形態(tài)，免疫細(xì)胞化學(xué)方法染色檢測到大量細(xì)胞表達(dá)施萬細(xì)胞特異性標(biāo)志物GFAP,S100。最后將ADSCs來源施萬細(xì)胞移植到運(yùn)動(dòng)皮層損傷的偏癱大鼠模型腦內(nèi)受