脂肪干細(xì)胞側(cè)腦室定向移植治療大鼠腦出血.pdf

1、第一部分
　　 目的：建立大鼠尾狀核ICH模型，并觀察大鼠ICH后不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)行為學(xué)和血腫周圍腦組織病理學(xué)的特點(diǎn)。
　　 方法：將成年SD大鼠40只，隨機(jī)分為假手術(shù)組和ICH組。ICH組大鼠通過立體定向術(shù)向尾狀核注入VII型膠原酶制成尾狀核ICH模型，并分為ICH后1d、3d、7d、14d及28d共5個(gè)亞組。假手術(shù)組以生理鹽水代替膠原酶。采用神經(jīng)行為學(xué)功能評(píng)分和HE染色分別觀察ICH大鼠神經(jīng)行為學(xué)和腦組織形態(tài)學(xué)的變化。

2、
　　 結(jié)果：成功建立了大鼠尾狀核ICH模型。假手術(shù)組在手術(shù)前及之后神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分無明顯變化，ICH組后1d亞組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分出現(xiàn)升高，3 d亞組評(píng)分升高最明顯，以后逐漸恢復(fù)，其中3 d亞組與1 d和7 d亞組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），3 d亞組與14 d、28 d亞組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)；7 d亞組與14 d及28 d亞組間神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。1

3、d亞組大鼠的尾狀核區(qū)域可見不規(guī)則血腫形成；3d亞組腦水腫明顯，細(xì)胞間隙增寬；7d亞組血腫周圍腦組織有膠質(zhì)細(xì)胞增生；14d亞組血腫區(qū)逐漸形成不規(guī)則囊腔；28d亞組時(shí)囊腔仍然存在，血腫周邊區(qū)見膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)一步增多。
　　 結(jié)論：大鼠VII型膠原酶誘導(dǎo)ICH模型死亡率低，成功率高，血腫穩(wěn)定,適合臨床實(shí)驗(yàn)研究，是比較理想的實(shí)驗(yàn)性ICH模型。ICH后大鼠神經(jīng)行為學(xué)的改變、血腫及囊腔的形成與出血時(shí)間有關(guān)，有助于選擇ICH的治療時(shí)間窗。

4、　　
　　 第二部分
　　 目的：ADSCs定向移植入ICH大鼠側(cè)腦室內(nèi)，觀察ADSCs的遷徙、分化情況及移植ADSCs后大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變。
　　 方法：體外培養(yǎng)大鼠ADSCs，于移植前48 h用BRDU抗原標(biāo)記ADSCs。另取SD大鼠50只制作大鼠尾狀核ICH模型，隨機(jī)分為ADSCs組及對(duì)照組，各25只。于造模后48h時(shí)進(jìn)行移植，ADSCs組右側(cè)腦室定向移植體外BRDU標(biāo)記的ADSCs，對(duì)照組右側(cè)腦室定向

5、注射等量生理鹽水，分別于移植后1、3、7、14及28d（每時(shí)間點(diǎn)5只大鼠）對(duì)大鼠進(jìn)行Zea Longa神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，評(píng)分后處死大鼠制作腦組織冰凍切片，行免疫熒光雙標(biāo)染色檢測(cè)BRDU陽性細(xì)胞及神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞的變化，采用TUNEL染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞，通過免疫組化觀察VEGF的表達(dá)。
　　 結(jié)果：體外培養(yǎng)的ADSCs表現(xiàn)出成脂成骨分化的能力，在移植后3、7、14 d，ADSCs組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯優(yōu)于對(duì)照組 （P<0.05）

6、。免疫雙熒光檢測(cè)顯示，BRDU標(biāo)記的ADSCs在大鼠腦組織內(nèi)存活并且向病灶部位遷移，部分分化為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞。TUNEL檢測(cè)顯示，移植后3d時(shí)ADSCs組凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯少于對(duì)照組（P<0.05）。移植3d后，ADSCs組VEGF的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。
　　 結(jié)論：經(jīng)側(cè)腦室定向移植的ADSCs在腦損傷病灶周圍可以存活，并可分化為神經(jīng)樣細(xì)胞；移植ADSCs后可抑制細(xì)胞凋亡，分泌VEGF促進(jìn)新生血管的生成