TGFβ2特異性dsRNA質(zhì)粒載體抑制大鼠結(jié)膜濾過泡瘢痕化的觀察和機制的初步研究.pdf

1、【目的】 觀察TGF-β<,2>特異性dsRNA質(zhì)粒載體對大鼠結(jié)膜濾過泡瘢痕化的抑制作用，并研究其產(chǎn)生的可能機制。 【材料和方法】 選取72只健康成年(3月齡左右)SD大鼠作為實驗動物，雙眼均實施濾過性手術(shù)，左眼為實驗眼，右眼為自身對照眼。72只大鼠隨機(隨機數(shù)字法)分為4組，每組18只，分別于左眼術(shù)中使用PT、MMC、PSH、PBS；術(shù)后觀察大鼠的一般情況和術(shù)眼前節(jié)情況，重點觀察濾過泡形態(tài)和存在時間等。術(shù)后1、

2、2、4周各組分別處死6只大鼠，摘取眼球，常規(guī)石蠟包埋、切片。進行HE染色、PCNA免疫組織化學(xué)染色、V-G染色、TGF-β<,2>免疫組織化學(xué)染色和TGF-β<,2> mRNA原位雜交檢查，檢測濾過泡區(qū)域成纖維細胞的數(shù)量和活性、膠原纖維的沉積情況、FGF-β<,2>蛋白及其mRNA的表達水平，并選用相應(yīng)的觀察指標(biāo)對染色結(jié)果進行半定量分析，所得資料使用SSPS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。 【結(jié)果】 1．選用大鼠作為實驗動物

3、，于濾過術(shù)中切除全層角鞏膜緣組織，建立了青光眼濾過泡瘢痕化動物模型。 2．各組大鼠術(shù)后全身及眼部情況未見明顯異常，無并發(fā)癥發(fā)生。 3．術(shù)后各周濾過泡存在情況：術(shù)后1周，PT組、MMC組、PSH組和PBS組存在的濾過泡百分率分別為100％(18/18)、100％(18/18)、72.2％(13/18)、66.7％(12/18)。其中，PT與PSH組以及MMC組與PSH組間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.023)；PT與P

4、BS組以及MMC組與PBS組間差異也具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.010)；PT與MMC組之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義；PBS與PSH組間差異也無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.500)。術(shù)后2周，PT組、MMC組、PSH組和PBS組存在的濾過泡百分率分別為91.7％(11/12)、83.3％(10/12)、8.3％(1/12)、16.7％(2/12)。其中，PT與PSH(P=0.000)、PT與PBS組(P=0.000)、MMC與PSH組(P

5、=0.000)、MMC與PBS組(P=0.002)之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義；PT與MMC組(P=0.500)、PBS與PSH組(P=0.500)之間差異均無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后4周，PT組、MMC組、PSH組和PBS組存在的濾過泡百分率分別為50.0％(3/6)、33.3％(2/6)、0％(0/6)、O％(0/6)。PT與PBS組(P=0.091)、PT與PSH組(P=0.091)、MMC與PBS組(P=0.227)、MMC與P

6、SH組(P=0.227)之間差異均無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義；MMC與PT組(P=0.500)之間差異也無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。 4. 以HE染色半定量測定成纖維細胞的數(shù)量。術(shù)后1周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中PT組與PSH組、PT組與PBS組、MMC組與PSH組及MMC組與PBS組之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)，而MMC組又低于PT組(P=0.002)，PSH組與PBS組(P=0.

7、699)之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后2周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中PT組與PSH組(P=0.009)、PT組與PBS組(P=0.002)、MMC組與PSH組(P=0.002)及MMC組與PBS組(P=0.002)之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，而MMC組又低于PT組(P=0.002)，PSH組與PBS組(P=0.093)之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后4周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)

8、計學(xué)意義(P=0.000)，其中MMC組與PT組、MMC組與PSH組及MMC組與PBS組之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)，而PT組與PSH組(P=0.093)、PT組與PBS組(P=0.699)及PSH組與PBS組(P=0.093)之間差異均無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。 5.PCNA免疫組織化學(xué)染色檢測成纖維細胞增殖活性。術(shù)后1周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中PT組與PSH組、PT組

9、與PBS組、MMC組與PSH組及MMC組與PBS組之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)，而MMC組又低于PT組(P=0.002)，PSH組與PBS組(P=0.180)之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后2周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中PT組與PSH組、PT組與PBS組、MMC組與PSH組及MMC組與PBS組之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)，而PT組與MMC組(P=0.052

10、)，PSH組與PBS組(P=0.180)之間的差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。 6.V-G染色檢測膠原纖維的沉積情況。術(shù)后1周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)，其中PT組與PSH組(P=0.002)、PT組與PBS組(P=0.002)、MMC組與PSH組(P=0.009)及MMC組與PBS組(P=0.004)之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，而PT組與MMC組(P=0.394)，PSH組與PBS組(P=0.5

11、89)之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后2周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中PT組與PSH組、PT組與PBS組、MMC組與PSH組及MMC組與PBS組之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)，而PT組與MMC組(P=0.485)，PSH組與PBS組(P=0.394)之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后4周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中PT組與PSH組、PT組與P

12、BS組、MMC組與PSH組及MMC組與PBS組之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)，而PT組與MMC組(P=0.132)，PSH組與PBS組(P=0.394)之間的差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。 7.TGF-β<,2>免疫組織化學(xué)染色檢測其蛋白表達水平。術(shù)后1周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中PT組與PSH組、PT組與PBS組、MMC組與PSH組及MMC組與PBS組之間差異均具有顯著的統(tǒng)

13、計學(xué)意義(P=0.002)，而MMC組又低于PT組(P=0.002)，PSH組與PBS組(P=0.180)之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后2周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中PT組與PSH組(P=0.009)、PT組與PBS組(P=0.015)、MMC組與PSH組(P=0.002)及MMC組與PBS組(P=0.002)之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，而MMC組又低于PT組(P=0.002)，PSH組與

14、PBS組(P=0.240)之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后4周：不同藥物處理組之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.073)。 8.TGF-β<,2> mRNA原位雜交檢測其表達水平。術(shù)后1周：不同藥物處理組之間差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中PT組與PSH組、PT組與PBS組、MMC組與PSH組及MMC組與PBS組之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)，而：MMC組又低于PT組(P=0.002)，PSH

15、組與PBS組(P=0.260)之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后2周：不同藥物處理組之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)，MMC組與PT組、MMC組與PSH組及MMC組與PBS組之間差異均具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)，而PT組與PSH組(P=0.093)、PT組與PBS組(P=0.054)、及PSH組與PBS組(P=0.394)之間差異均無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后4周：不同藥物處理組之間差異無顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.

16、758)。 【結(jié)論】 1.大鼠行全層角鞏膜緣組織切除的濾過術(shù)是一種比較成功的青光眼濾過泡瘢痕化動物模型，具有操作規(guī)范，濾過泡維持時間較長和影響瘢痕反應(yīng)的干擾因素少的優(yōu)點。 2.濾過術(shù)中應(yīng)用PT抑制濾過泡瘢痕化是安全的，可耐受的。 3.PT和MMC均可明顯的延長濾過泡的維持時間，二者之間差異無顯著性。 4.在大鼠體內(nèi)，濾過術(shù)中應(yīng)用PT和MMC均可顯著的降低TGF-β<,2> mRNA及其蛋白表達水平

17、，抑制成纖維細胞的數(shù)量和增殖活性，減少膠原纖維的沉積。 5.PT抑制大鼠結(jié)膜濾過泡瘢痕化的機制可能為：PT通過干擾TGF-β<,2>mRNA表達，減少了TGF-B2蛋白的合成。從而抑制成纖維細胞增殖、遷移及其生物活性，減少膠原纖維的沉積，從而減輕濾過泡的瘢痕化反應(yīng)，達到抑制濾過泡瘢痕化的作用，改善手術(shù)效果的目的。 6. 在本實驗選取的轉(zhuǎn)染方式和質(zhì)粒劑量的前提下，PT的抗增殖作用雖較MMC弱，但其未發(fā)生組織細胞形態(tài)和超微結(jié)