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文檔簡介
1、背景與目的:
新生血管性眼病包括:感染或化學(xué)傷所致的角膜新生血管;虹膜表面及房角新生血管;合并纖維血管膜形成導(dǎo)致房角關(guān)閉而產(chǎn)生的新生血管性青光眼;脈絡(luò)膜新生血管導(dǎo)致的年齡相關(guān)性黃斑變性以及視網(wǎng)膜新生血管而致的增殖性視網(wǎng)膜病變等眼病。角膜感染或化學(xué)傷后,炎性細(xì)胞尤其是單核/巨噬細(xì)胞浸潤是主要的病理變化。迄今為止,新生血管性眼病的確切發(fā)病機制尚不明了,因而尚缺乏確切有效的藥物預(yù)防或治療手段,所有針對以上新生血管性眼病的治療方法
2、及其療效均不甚理想,從而使以上眼病成為致盲的主要原因之一。據(jù)1990年以來國內(nèi)四川、湖北、浙江和山東的資料顯示,角膜病變致盲約占我國致盲疾病的1/4。由此,針對新生血管性眼病確切發(fā)病機制及防治的研究也就顯得極其重要。
SDF-1α/CXCR4是一對信號分子。CXCR4在單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、造血和內(nèi)皮干祖細(xì)胞等有廣泛表達(dá),受其配體SDF-1α/CXCL12激活作用后,能發(fā)揮介導(dǎo)細(xì)胞的趨化、粘附、增生、凋亡等作用。CXCR4在
3、血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的研究報道提示,SDF-1α/CXCR4對新生血管的形成發(fā)揮重要作用。已有報告SDF-1α/CXCR4信號在脈絡(luò)膜新生血管、糖尿病視網(wǎng)膜病變、缺氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變等眼部新生血管疾病中發(fā)揮重要的作用。而SDF-1α/CXCR4信號對角膜新生血管形成發(fā)揮的作用仍未闡明。為進(jìn)一步明確SDF-1α/CXCR4對角膜新生血管形成的具體作用機制,本實驗利用堿燒傷法構(gòu)建角膜新生血管模型,局部滴用SDF-1α中和性抗體或CXCR4拮抗劑
4、,觀察新生血管發(fā)生情況,并從基因和蛋白水平檢測相關(guān)因子表達(dá)。通過培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞,以SDF-1α重組蛋白、SDF-1α中和抗體及CXCR4拮抗劑進(jìn)行處理,觀測SDF-1α重組蛋白、SDF-1α中和抗體及CXCR4拮抗劑對巨噬細(xì)胞VEGF分泌的影響。為探索SDF-1α/CXCR4信號在眼部新生血管發(fā)生中的作用及其可能機制提供實驗依據(jù)。
材料與方法:
1、30只BALB/c小鼠制作左眼堿燒傷誘導(dǎo)實驗性角膜新生血管
5、(CRNV)模型,通過眼局部滴藥隨機分為10μg/mLSDF-1α中和性抗體實驗組、5μg/mLCXCR4拮抗劑實驗組、0.2%透明質(zhì)酸鈉對照組,每組10只,自堿燒傷后分別給予10μg/mLSDF-1α中和性抗體、5μg/mLCXCR4拮抗劑或0.2%透明質(zhì)酸鈉局部點眼,每同3次,持續(xù)1w,堿燒傷后2w裂隙燈顯微鏡下觀察各組角膜的炎癥反應(yīng)、角膜穿孑L及新生血管形成情況,并處死小鼠,取堿燒傷眼球行免疫組織化學(xué)法檢測各組角膜組織中CD31陽
6、性新生血管數(shù)目和表達(dá)面積,比較各組之間差異,分析SDF-1α中和性抗體和CXCR4拮抗劑對CRNV形成的影響。
2、同樣方法及分組構(gòu)建堿燒傷模型。取上述藥物干預(yù)后2d、4d和7d等時間點角膜組織標(biāo)本,抽提總RNA后,RT-PCR法檢測各組VEGF等分子mRNA的表達(dá),比較各組之間的差異,并進(jìn)一步檢測各分子蛋白水平的表達(dá)。分析CXCR4拮抗劑對堿燒傷角膜中VEGF分子表達(dá)的影響。
3、體外實驗驗證動物實驗。體外
7、培養(yǎng)小鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞,應(yīng)用SDF-1α重組蛋白、SDF-1α中性抗體或CXCR4拮抗劑等分子進(jìn)行干預(yù),檢測干預(yù)后VEGF的表達(dá)。
結(jié)果:
重復(fù)性實驗結(jié)果顯示:堿燒傷誘導(dǎo)后SDF-1α中和性抗體和CXCR4拮抗劑干預(yù)組小鼠CRNV面積比對照組小鼠明顯減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。同時堿燒傷小鼠角膜組織內(nèi)VEGF等分子的表達(dá)在干預(yù)組也較對照組降低(P<0.05)。
體外實驗發(fā)現(xiàn),SD
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