丹參酮ⅡA在糖尿病血管并發(fā)癥中的作用及與MAPK的關(guān)系.pdf

1、目的：研究丹參酮ⅡA對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用，及與 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路的關(guān)系；并對(duì)糖尿病大鼠血管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)方法進(jìn) 行探討，建立糖尿病大鼠血管平滑肌細(xì)胞模型。 方法：1)取正常大鼠主動(dòng)脈，用組織貼壁法做血管平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)，以 及用STZ制作糖尿病大鼠模型并做糖尿病血管平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)，用二步 法進(jìn)行SMA免疫組織化學(xué)染色來(lái)鑒定細(xì)胞；2)MTT法建立TSN的毒性試驗(yàn)

2、標(biāo) 準(zhǔn)曲線；3)BrdU摻入DNA的ELISA法測(cè)定細(xì)胞DNA合成；4)熒光酶標(biāo)儀的 方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的含量，同位素示蹤法測(cè)定MAPK的活性。 結(jié)果：1)原代培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞通過(guò)SMA免疫組織化學(xué)染色后發(fā)現(xiàn)其 平滑肌細(xì)胞特有的肌纖維，確定所培養(yǎng)的細(xì)胞為血管平滑肌細(xì)胞；2)高糖可誘 導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖和DNA合成，且呈劑量和時(shí)間依賴(lài)性；同時(shí)可刺激平滑 肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度

3、升高及MAPK活性增強(qiáng)；3)丹參酮ⅡA對(duì)高糖誘導(dǎo)的 血管平滑肌細(xì)胞的增殖和DNA合成呈現(xiàn)顯著的抑制作用，而且降低了細(xì)胞內(nèi)鈣 離子的濃度和MAPK水平；4)建立糖尿病大鼠模型一個(gè)月后做血管平滑肌細(xì)胞 原代培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)其呈現(xiàn)異?？焖僭鲋碃顟B(tài)，且細(xì)胞內(nèi)MAPK活性較高，使用TSN 后，可明顯抑制此現(xiàn)象。 結(jié)論：1)丹參酮ⅡA對(duì)高糖誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖及DNA合成具有明顯抑 制作用的機(jī)理可能是其