子宮內(nèi)膜和單個胚胎FUT基因表達的定量分析及LIF因子對FUT7表達調(diào)控作用的研究.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文子宮內(nèi)膜和單個胚胎FUT基因表達的定量分析及LIF因子對FUT7表達調(diào)控作用的研究姓名：張琦申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：燕秋20050601FUT2基因和內(nèi)參GAPDH基因的擴增，對不同循環(huán)數(shù)的PCR擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳和微流控芯片技術(shù)檢測，同時應(yīng)用Real—TimePCR技術(shù)對上述基因進行分析，并比較三種方法的靈敏度和最低檢測限度。結(jié)果顯示，F(xiàn)UT2基因瓊脂糖凝膠電泳可檢測最低限

2、度為25個循環(huán)的PCR擴增產(chǎn)物，而20個循環(huán)擴增的產(chǎn)物無法檢測到；微流控芯片技術(shù)可以檢測到稀釋5倍的經(jīng)20個循環(huán)擴增的PCR產(chǎn)物，其靈敏度提高103倍。Real—TimePCR有較高靈敏度和特異性，對于單胚胎的基因擴增可在1888個循環(huán)檢測到產(chǎn)物，并可實時監(jiān)測，準確定量，在重復(fù)性和穩(wěn)定性有明顯優(yōu)勢。(二)應(yīng)用RealTimePCR技術(shù)對小鼠受孕不同天數(shù)子宮內(nèi)膜和不同發(fā)育時期單個胚胎FUT2基因的表達進行定量分析，并改進了單胚胎基因定量分

3、析方法。結(jié)果表明，Real—TimePCR方法可以準確的對目的基因進行定量，靈敏度高，對2cell期的單個胚胎的基因表達即可進行檢測。FUT2基因在受孕子宮內(nèi)膜和胚胎均有表達，但孕D4天子宮內(nèi)膜和胚胎都有降低趨勢，子宮內(nèi)膜拷貝數(shù)約從10“降至10”個，胚胎拷貝數(shù)約從108降至107個。結(jié)果尚提示FUT2基因可能與著床前胚胎的發(fā)育成熟及子宮內(nèi)膜接受態(tài)的建立有關(guān)，但具體機制尚不清楚，其基因表達量的改變?yōu)檫M一步開展其功能研究提供了一定的實驗依

4、據(jù)。(三)對小鼠不同發(fā)育時期單個胚胎表達FUT基因家族(FUTI，F(xiàn)UT4，F(xiàn)UT7，F(xiàn)UT8，F(xiàn)UT9夕進行Real—TimePCR定量分析。結(jié)果顯示：在發(fā)育不同時期FUTI基因，F(xiàn)UT4基因和FUT7基因的表達逐漸升高，到桑椹期達到高峰并持續(xù)至囊胚期；FUT8基因在各發(fā)育時期的表達相對穩(wěn)定，無明顯變化趨勢；FUT9基因在8cell高表達，桑椹期和囊胚期開始降低。FUT基因家族各時期表達量及變化趨勢各不相同，但卻和各自合成的相關(guān)寡糖抗